人参茎叶霜冻前后的质量变化(1)
[收稿日期] 2014-05-19
[基金项目] 国家科技支撑计划项目(2011BAI03B01)；国家公益性行业科研专项(201303111)；吉林省科技发展计划项目(20126046，20140204013YY)；吉林省中医药产业发展专项(YYZX201258)；国家自然科学基金项目(31000154)
[通信作者] *张连学，教授，博士生导师，主要研究药用植物栽培与加工，Tel/Fax：(0431)84532952，E-mail：zlx863@163.com
[作者简介] 赵岩，副教授，硕士生导师，研究方向为天然药物化学成分与生物活性，Tel：13404325685，E-mail：zhyjlu79@163.com
[摘要] 采用HPLC测定人参茎叶受冻前后单体皂苷、游离氨基酸含量，紫外分光光度法测定总酚含量及DPPH法测定自由基清除能力的变化，考察人参茎叶霜冻前后的质量变化。结果表明，受冻后人参茎中9种单体皂苷含量除Rg1，Re升高外，其余皂苷含量均有所下降，人参叶中皂苷含量均明显降低；受冻后人参茎中游离氨基总含量降低，而人参叶氨基酸总含量升高；受冻后人参茎、叶中的总酚含量降低，但对自由基的清除能力提高。霜冻对人参茎叶质量产生一定的影响。
, http://www.100md.com
[关键词] 人参茎叶；霜冻；人参皂苷；氨基酸；DPPH清除率
人参Panax ginseng C. A. Mey.为五加科植物，传统入药部位为根及根茎[1]。人参皂苷是人参的主要生物活性成分，广泛分布于人参各个部位[2]。为了充分利用人参资源，人们对人参的研究拓展到茎叶部分。研究表明，人参茎叶皂苷不仅具有抗肿瘤[3]、抗菌抗病毒[4]、保肝护心[5]、提高免疫[6-8]、促进细胞增殖[9]等作用，在缓解疲劳方面也起到一定的作用[10-11]。吉林省是人参的道地产区，在人参采收季节，地上部分常发生霜冻，可能对人参茎叶中化学成分造成一定影响。目前，还没有这方面的研究报道。课题组通过对人参茎叶受冻前后化学成分及对自由基清除能力的对比研究，探讨霜冻对人参茎叶质量的影响。为人参茎叶药材的生产与利用提供了相关数据参考。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
人参茎叶药材采自吉林农业大学中药材学院药用植物园[受冻茎叶(131014)和未受冻茎叶(131007)均采集于同株人参，采集十株，形成十对供试药材，阴干，实验时成对对比测试]，经吉林农业大学张连学教授鉴定为五加科植物人参P. ginseng的茎叶。21种氨基酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，纯度均≥98%)；人参单体皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd(吉林大学化学院公共化学教学与研究中心，分析纯，纯度均≥98%)，三乙胺、乙腈色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为国产分析纯。
FW-100型高速万能粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)；KQ-250B超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；2XZ-4型旋片式真空泵(上海博一泵业制造有限公司)；HH-6B数显恒温水浴锅(上海明桥精密科学仪器有限公司)；TG628A分析电子天平(1/1万)(上海皖衡电子仪器有限公司)；CXTH-3000高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司)；UV-754紫外-可见分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司)。
, 百拇医药
1.2 皂苷含量测定[12]
1.2.1 色谱条件 Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温30 ℃，检测波长203 nm，乙腈(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱(0～24 min，19.5%～21.5%A； 24～26 min，21.5%A；26～30 min，21.5%～29%A；30～52 min，29%～31.5%A；52～55 min，31.5%～38%A)，流速1.0 mL·min-1，进样量20 μL。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd适量，加甲醇溶解，配制质量浓度分别为1 g·L-1混合溶液，4 ℃保存。
1.2.3 供试品溶液的制备 取样品0.5 g，精密称定，置于索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸移入50 mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇25 mL，密塞，放置过夜，超声处理30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，0.45 μm微孔滤膜过滤，进行色谱分析。
, 百拇医药
1.2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.1～10 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，进行液相分析。以人参皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd的质量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，可得9种人参皂苷在0.2～20 μg呈良好的线性关系(R2 >0.999 3)。
1.2.5 精密度试验 取混合人参皂苷对照品溶液20 μL，连续进样6 次，测定峰面积。结果，9种人参皂苷峰面积的RSD在0.79%～1.3%，表明仪器精密度良好。
1.2.6 稳定性试验 分别于0，1，2，4，6，8，12，24 h，精密吸取对照品溶液20 μL，注入液相，测定峰面积。结果，9种单体皂苷峰面积的RSD在0.82%～1.4%，表明样品在24 h内稳定。
1.2.7 重复性试验 按上述供试品溶液制备方法，称取同一批供试品6 份。按上述色谱条件进样测定峰面积，计算单体皂苷含量。结果，未受冻人参茎中9种单体皂苷的RSD在0.88%～2.5%，受冻人参茎中9种单体皂苷的RSD在1.1%～1.9%；未受冻人参叶中9种单体皂苷的RSD在1.0%～1.9%，受冻人参叶中9种单体皂苷的RSD在0.98%～2.0%。, 百拇医药(赵岩 马爽 蔡恩博 刘双利 杨鹤 张连学 王士杰)
[基金项目] 国家科技支撑计划项目(2011BAI03B01)；国家公益性行业科研专项(201303111)；吉林省科技发展计划项目(20126046，20140204013YY)；吉林省中医药产业发展专项(YYZX201258)；国家自然科学基金项目(31000154)
[通信作者] *张连学，教授，博士生导师，主要研究药用植物栽培与加工，Tel/Fax：(0431)84532952，E-mail：zlx863@163.com
[作者简介] 赵岩，副教授，硕士生导师，研究方向为天然药物化学成分与生物活性，Tel：13404325685，E-mail：zhyjlu79@163.com
[摘要] 采用HPLC测定人参茎叶受冻前后单体皂苷、游离氨基酸含量，紫外分光光度法测定总酚含量及DPPH法测定自由基清除能力的变化，考察人参茎叶霜冻前后的质量变化。结果表明，受冻后人参茎中9种单体皂苷含量除Rg1，Re升高外，其余皂苷含量均有所下降，人参叶中皂苷含量均明显降低；受冻后人参茎中游离氨基总含量降低，而人参叶氨基酸总含量升高；受冻后人参茎、叶中的总酚含量降低，但对自由基的清除能力提高。霜冻对人参茎叶质量产生一定的影响。
, http://www.100md.com
[关键词] 人参茎叶；霜冻；人参皂苷；氨基酸；DPPH清除率
人参Panax ginseng C. A. Mey.为五加科植物，传统入药部位为根及根茎[1]。人参皂苷是人参的主要生物活性成分，广泛分布于人参各个部位[2]。为了充分利用人参资源，人们对人参的研究拓展到茎叶部分。研究表明，人参茎叶皂苷不仅具有抗肿瘤[3]、抗菌抗病毒[4]、保肝护心[5]、提高免疫[6-8]、促进细胞增殖[9]等作用，在缓解疲劳方面也起到一定的作用[10-11]。吉林省是人参的道地产区，在人参采收季节，地上部分常发生霜冻，可能对人参茎叶中化学成分造成一定影响。目前，还没有这方面的研究报道。课题组通过对人参茎叶受冻前后化学成分及对自由基清除能力的对比研究，探讨霜冻对人参茎叶质量的影响。为人参茎叶药材的生产与利用提供了相关数据参考。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
人参茎叶药材采自吉林农业大学中药材学院药用植物园[受冻茎叶(131014)和未受冻茎叶(131007)均采集于同株人参，采集十株，形成十对供试药材，阴干，实验时成对对比测试]，经吉林农业大学张连学教授鉴定为五加科植物人参P. ginseng的茎叶。21种氨基酸(国药集团化学试剂有限公司，分析纯，纯度均≥98%)；人参单体皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd(吉林大学化学院公共化学教学与研究中心，分析纯，纯度均≥98%)，三乙胺、乙腈色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为国产分析纯。
FW-100型高速万能粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)；KQ-250B超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；2XZ-4型旋片式真空泵(上海博一泵业制造有限公司)；HH-6B数显恒温水浴锅(上海明桥精密科学仪器有限公司)；TG628A分析电子天平(1/1万)(上海皖衡电子仪器有限公司)；CXTH-3000高效液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司)；UV-754紫外-可见分光光度计(山东高密彩虹分析仪器有限公司)。
, 百拇医药
1.2 皂苷含量测定[12]
1.2.1 色谱条件 Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱温30 ℃，检测波长203 nm，乙腈(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱(0～24 min，19.5%～21.5%A； 24～26 min，21.5%A；26～30 min，21.5%～29%A；30～52 min，29%～31.5%A；52～55 min，31.5%～38%A)，流速1.0 mL·min-1，进样量20 μL。
1.2.2 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd适量，加甲醇溶解，配制质量浓度分别为1 g·L-1混合溶液，4 ℃保存。
1.2.3 供试品溶液的制备 取样品0.5 g，精密称定，置于索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流3 h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸移入50 mL锥形瓶中，精密加水饱和正丁醇25 mL，密塞，放置过夜，超声处理30 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 mL，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，0.45 μm微孔滤膜过滤，进行色谱分析。
, 百拇医药
1.2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.1～10 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，进行液相分析。以人参皂苷Rg1，Re，Rf，Rb1，Rg2，Rc，Rb2，Rb3，Rd的质量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，可得9种人参皂苷在0.2～20 μg呈良好的线性关系(R2 >0.999 3)。
1.2.5 精密度试验 取混合人参皂苷对照品溶液20 μL，连续进样6 次，测定峰面积。结果，9种人参皂苷峰面积的RSD在0.79%～1.3%，表明仪器精密度良好。
1.2.6 稳定性试验 分别于0，1，2，4，6，8，12，24 h，精密吸取对照品溶液20 μL，注入液相，测定峰面积。结果，9种单体皂苷峰面积的RSD在0.82%～1.4%，表明样品在24 h内稳定。
1.2.7 重复性试验 按上述供试品溶液制备方法，称取同一批供试品6 份。按上述色谱条件进样测定峰面积，计算单体皂苷含量。结果，未受冻人参茎中9种单体皂苷的RSD在0.88%～2.5%，受冻人参茎中9种单体皂苷的RSD在1.1%～1.9%；未受冻人参叶中9种单体皂苷的RSD在1.0%～1.9%，受冻人参叶中9种单体皂苷的RSD在0.98%～2.0%。, 百拇医药(赵岩 马爽 蔡恩博 刘双利 杨鹤 张连学 王士杰)