不同产地和不同生长期的浙江雪胆有效成分积累变化(1)
[收稿日期] 2014-04-04
[基金项目] 浙江省科技厅公益技术研究项目(2011C22101)；浙江省药用植物种质改良和质量控制技术重点实验室开放项目
[通信作者] *金孝锋，博士，教授，主要从事植物分类和生物多样性研究，Tel：(0571)28866880，E-mail：docxfjin@163.com
[作者简介] 杨王伟，硕士研究生，Tel： (0571)28866880，E-mail： yangwangwei0576@163.com
[摘要] 根据2010年版《中国药典》的方法，对浙江雪胆不同产地、不同年份和不同季节的块茎样品，以及2012年夏季的根、茎、叶样品，进行水分、醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的检测。结果表明，①总皂苷含量随块茎个体质量增加先增后减，质量达到594.06 g时，总皂苷含量最高；②不同产地活性成分含量差异显著，总皂苷含量乌岩岭>武功山>左溪>龙游，总多糖含量乌岩岭>左溪>龙游>武功山；③不同年份间醇溶性浸出物和总皂苷含量稳定，但总多糖含量差异显著，2012年高于2013年；④在不同的季节中，秋季各活性成分含量最高，为最佳采收季节；⑤不同的营养器官成分含量测试，块茎醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量均最高，夏季的叶片也有较高含量的醇溶性浸出物和总皂苷。从而为珍稀药用植物浙江雪胆的种植、采收，以及更好的合理利用提供理论依据。
, 百拇医药
[关键词] 浙江雪胆；醇溶性浸出物；总皂苷；总多糖；年季变化；采收
传统中药“雪胆”为雪胆属Hemsleya Cogn.植物的块茎，具有清热解毒、消肿的功效[1]，民间广泛用于治疗肠炎、菌痢、冠心病、气管炎、慢性子宫颈炎等多种疾病[2]，具有很高的药用价值。据报道，中药雪胆在我国西南省、区生药入药[3]，在四川和云南分别以“金龟莲”和“罗锅底”入药[4]，其常含有的有效活性成分有雪胆甲素(hemslecin A)、雪胆乙素(hemslecin B)、齐墩果酸(oleanolic acid)等。经研究发现，曲莲H. amabilis的提取物对肿瘤细胞有抑制作用[5]，彭县雪胆H. pengxianensis所含的成分具有抗HIV病毒的活性[6]。雪胆属植物具有丰富的药用价值，该属的彭县雪胆 [2]、中华雪胆H. chinensis[7]、帽果雪胆H. mitrata[8]等已广泛应用。
, 百拇医药
浙江雪胆H. zhejiangensis为1985年发表的雪胆属新种[9]，最初仅发现于浙江省泰顺县乌岩岭，被认为是浙江特有种[10]。后经标本查阅和野外调查，江西武功山也有分布[11]，浙江龙游为近年新发现的分布点。但其分布区域狭窄，多生于竹林下，极易受人为因素干扰，种群稳定性低，因而数量稀少，资源十分有限[12]。此外，对浙江雪胆的脂溶性物质[13]、雪胆甲素含量[14]、总皂苷含量[15]等测定结果表明其活性成分含量很高。
对浙江雪胆的研究，目前仅在药用成分、群落学和组织培养领域等方面有少量的报导[16]，且研究范围狭小。本文对浙江雪胆不同分布地、不同年份、不同季节的块茎和2012年夏季泰顺乌岩岭种群的根、茎和叶的水分、醇溶性浸出物、总皂苷、总多糖以及雪胆甲素和雪胆乙素含量进行检测并分析相关性因素，为以后广泛种植和开发利用提供理论依据。
, http://www.100md.com
1 研究方法
1.1 野外取样及处理 浙江龙游、浙江泰顺(左溪和乌岩岭)、江西武功山4个自然居群内，于2012—2013年，按照春(4月中旬)、夏(7月中旬)、秋(10月中旬)、冬(1月中旬)4个季度定期随机采集浙江雪胆块茎个体大小不同的样品，共计88份，并采集夏季生长旺盛时期乌岩岭种群的茎、叶和根，经浙江大学郑朝宗教授(命名人)鉴定为浙江雪胆H. zhejiangensis，用于水分、醇溶性浸出物、总皂苷、总多糖、雪胆甲素和雪胆乙素含量的检测。各个采集地的自然概况详见表1。
对野外采集的块茎洗净后称量鲜重，切片放于阴凉处自然阴干；茎、叶和根也去除杂质后阴干。阴干后的材料研磨成粉末备用，每个样品在成分含量测定时做5个重复。
1.2 含水量和醇溶性浸出物含量测定 水分和醇溶性浸出物的含量分别参照《中国药典》2010年版(一部)附录IX H水分测定法(烘干法)和《中国药典》2010年版(一部)附录X A醇溶性浸出物测定法项下的热侵法进行测定[17]。
, 百拇医药
1.3 总皂苷含量测定 每个样品称取粉末1.0 g，加15 mL 70%乙醇提取3次，每次1.5 h。合并滤液挥干溶剂，用水定容至10 mL，用20 mL石油醚脱脂，再用正丁醇萃取。挥干萃取液的溶剂用50%乙醇定容至50 mL备用。
称取齐墩果酸对照品1.8 mg，用甲醇溶解并稀释至25 mL，作为对照品溶液。量取该对照品溶液1.2，1.4，1.5，1.6，1.8，2.0 mL水浴挥干甲醇，加入新配5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL和高氯酸1.0 mL，60 ℃水浴15 min。冷却至室温后加冰醋酸10 mL，摇匀。以相同试剂作空白对照，于548 nm处测定吸光度，以含量为X轴，吸光度为Y轴，绘制标准曲线。
取样品溶液0.6 mL，按标准曲线制备项下方法进行测定，对照标准曲线计算出样品的总皂苷含量。
1.4 总多糖测定 每个样品称取粉末1.0 g，加30 mL蒸馏水提取2次，每次2 h。过滤后合并滤液并定容至100 mL。取5.0 mL上述滤液，加入20 mL无水乙醇，混匀5 min，3 000 r·min-1离心5 min。残渣用80%乙醇洗涤5次，用蒸馏水溶解并定容至50 mL备用。, 百拇医药(杨王伟 雷祖培 王为民 梁卫青 周莹莹 金孝锋)
[基金项目] 浙江省科技厅公益技术研究项目(2011C22101)；浙江省药用植物种质改良和质量控制技术重点实验室开放项目
[通信作者] *金孝锋，博士，教授，主要从事植物分类和生物多样性研究，Tel：(0571)28866880，E-mail：docxfjin@163.com
[作者简介] 杨王伟，硕士研究生，Tel： (0571)28866880，E-mail： yangwangwei0576@163.com
[摘要] 根据2010年版《中国药典》的方法，对浙江雪胆不同产地、不同年份和不同季节的块茎样品，以及2012年夏季的根、茎、叶样品，进行水分、醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量的检测。结果表明，①总皂苷含量随块茎个体质量增加先增后减，质量达到594.06 g时，总皂苷含量最高；②不同产地活性成分含量差异显著，总皂苷含量乌岩岭>武功山>左溪>龙游，总多糖含量乌岩岭>左溪>龙游>武功山；③不同年份间醇溶性浸出物和总皂苷含量稳定，但总多糖含量差异显著，2012年高于2013年；④在不同的季节中，秋季各活性成分含量最高，为最佳采收季节；⑤不同的营养器官成分含量测试，块茎醇溶性浸出物、总皂苷和总多糖含量均最高，夏季的叶片也有较高含量的醇溶性浸出物和总皂苷。从而为珍稀药用植物浙江雪胆的种植、采收，以及更好的合理利用提供理论依据。
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[关键词] 浙江雪胆；醇溶性浸出物；总皂苷；总多糖；年季变化；采收
传统中药“雪胆”为雪胆属Hemsleya Cogn.植物的块茎，具有清热解毒、消肿的功效[1]，民间广泛用于治疗肠炎、菌痢、冠心病、气管炎、慢性子宫颈炎等多种疾病[2]，具有很高的药用价值。据报道，中药雪胆在我国西南省、区生药入药[3]，在四川和云南分别以“金龟莲”和“罗锅底”入药[4]，其常含有的有效活性成分有雪胆甲素(hemslecin A)、雪胆乙素(hemslecin B)、齐墩果酸(oleanolic acid)等。经研究发现，曲莲H. amabilis的提取物对肿瘤细胞有抑制作用[5]，彭县雪胆H. pengxianensis所含的成分具有抗HIV病毒的活性[6]。雪胆属植物具有丰富的药用价值，该属的彭县雪胆 [2]、中华雪胆H. chinensis[7]、帽果雪胆H. mitrata[8]等已广泛应用。
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浙江雪胆H. zhejiangensis为1985年发表的雪胆属新种[9]，最初仅发现于浙江省泰顺县乌岩岭，被认为是浙江特有种[10]。后经标本查阅和野外调查，江西武功山也有分布[11]，浙江龙游为近年新发现的分布点。但其分布区域狭窄，多生于竹林下，极易受人为因素干扰，种群稳定性低，因而数量稀少，资源十分有限[12]。此外，对浙江雪胆的脂溶性物质[13]、雪胆甲素含量[14]、总皂苷含量[15]等测定结果表明其活性成分含量很高。
对浙江雪胆的研究，目前仅在药用成分、群落学和组织培养领域等方面有少量的报导[16]，且研究范围狭小。本文对浙江雪胆不同分布地、不同年份、不同季节的块茎和2012年夏季泰顺乌岩岭种群的根、茎和叶的水分、醇溶性浸出物、总皂苷、总多糖以及雪胆甲素和雪胆乙素含量进行检测并分析相关性因素，为以后广泛种植和开发利用提供理论依据。
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1 研究方法
1.1 野外取样及处理 浙江龙游、浙江泰顺(左溪和乌岩岭)、江西武功山4个自然居群内，于2012—2013年，按照春(4月中旬)、夏(7月中旬)、秋(10月中旬)、冬(1月中旬)4个季度定期随机采集浙江雪胆块茎个体大小不同的样品，共计88份，并采集夏季生长旺盛时期乌岩岭种群的茎、叶和根，经浙江大学郑朝宗教授(命名人)鉴定为浙江雪胆H. zhejiangensis，用于水分、醇溶性浸出物、总皂苷、总多糖、雪胆甲素和雪胆乙素含量的检测。各个采集地的自然概况详见表1。
对野外采集的块茎洗净后称量鲜重，切片放于阴凉处自然阴干；茎、叶和根也去除杂质后阴干。阴干后的材料研磨成粉末备用，每个样品在成分含量测定时做5个重复。
1.2 含水量和醇溶性浸出物含量测定 水分和醇溶性浸出物的含量分别参照《中国药典》2010年版(一部)附录IX H水分测定法(烘干法)和《中国药典》2010年版(一部)附录X A醇溶性浸出物测定法项下的热侵法进行测定[17]。
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1.3 总皂苷含量测定 每个样品称取粉末1.0 g，加15 mL 70%乙醇提取3次，每次1.5 h。合并滤液挥干溶剂，用水定容至10 mL，用20 mL石油醚脱脂，再用正丁醇萃取。挥干萃取液的溶剂用50%乙醇定容至50 mL备用。
称取齐墩果酸对照品1.8 mg，用甲醇溶解并稀释至25 mL，作为对照品溶液。量取该对照品溶液1.2，1.4，1.5，1.6，1.8，2.0 mL水浴挥干甲醇，加入新配5%香草醛-冰醋酸溶液0.4 mL和高氯酸1.0 mL，60 ℃水浴15 min。冷却至室温后加冰醋酸10 mL，摇匀。以相同试剂作空白对照，于548 nm处测定吸光度，以含量为X轴，吸光度为Y轴，绘制标准曲线。
取样品溶液0.6 mL，按标准曲线制备项下方法进行测定，对照标准曲线计算出样品的总皂苷含量。
1.4 总多糖测定 每个样品称取粉末1.0 g，加30 mL蒸馏水提取2次，每次2 h。过滤后合并滤液并定容至100 mL。取5.0 mL上述滤液，加入20 mL无水乙醇，混匀5 min，3 000 r·min-1离心5 min。残渣用80%乙醇洗涤5次，用蒸馏水溶解并定容至50 mL备用。, 百拇医药(杨王伟 雷祖培 王为民 梁卫青 周莹莹 金孝锋)