土槿皮药材定量方法研究(1)
[收稿日期] 2014-06-27
[通信作者] *陆颂规，高级工程师，主要从事中药研制工作，Tel：(020)81157722，E-mail：lsg0518@sohu.com
[作者简介] 陈丽斯，助理工程师，主要从事中药研制工作，Tel：13823402162，E-mail：lingengxuan@sina.com
[摘要] 土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus的干燥树皮，是外用杀菌止痒药复方土槿皮酊的原料药材。目前土槿皮药材质量标准收载于《广东省中药材标准》(第2册)，但其质量标准中仅有薄层鉴别项而无含量测定项，未能更有效地监控土槿皮药材的质量。该文首次建立反相高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸峰，并用外标法计算其含量，结果在确定的色谱条件下，目标成分峰与相邻杂质峰达到有效分离，3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液质量浓度在1.00～25.0 mg·L-1时峰面积呈良好线性关系，标准曲线为Y=77.33X+7.904，r=0.999 5；平均回收率为101.0%，RSD为1.3%。采用高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸的含量，所建立的方法操作步骤简单，稳定性和重复性好，准确度高，可靠性强，能为更有效监控土槿皮药材质量提供了有力的技术支持。
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[关键词] 土槿皮；药材监控；3，3′-二-O-甲基鞣花酸
土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. et Perry的干燥树皮。历代本草对其记载较少，可在《生草药性备要》、《本草求原》和《岭南采药录》找到其较早的记载，其入药首见于清·何克谏著的《生草药性备要》[1]。《中药大辞典》、《广东中药志》、《中华本草》均将其收录入药，味苦、辛，性凉，功能清热解毒、燥湿、杀虫，主治脚气湿烂、湿疹、疥癣，疳疮，肾囊痈，烧烫伤[2]。自清至今，土槿皮用于杀虫、治癣有近300年的应用历史[3]，并有研究对其抗菌化合物进行分离与鉴定。现代土槿皮药材标准收载于《广东省中药材标准》(第2册)，由于其质量标准过于简单，仅有薄层鉴别项而无含量测定项[4]，故本文制订一种测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸含量的方法，旨在为土槿皮药材质量监控提供有效的技术支持。本次实验所用的含量测定指标性物质3，3′-二-O-甲基鞣花酸存在于土槿皮中，属于鞣花酸衍生物的一种，资料表明，鞣花酸具有抗氧化性、抗癌变、抗诱变[5]、抗突变作用，还兼备抗菌、抗病毒作用[6]，被广泛应用于食品、医药医疗和化妆品等领域[7]。
, 百拇医药
1 材料
1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱系统(包括G1311C四元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D DAD检测器和ChemStation色谱工作站)。
1.2 药材与试剂 3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品(含量98%，深圳市美荷生物科技有限公司)；土槿皮对照药材(中国食品药品检定研究院，批号1821-0301)；土槿皮药材(批号100602-2，110601-1，110601-2)产地为广西，取于广州白云山敬修堂药业股份有限公司，经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定为桃金娘科植物水翁C. operculatus的干燥树皮；含量测定用甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP80A (4.6 mm×250 mm，4 μm)；流动相甲醇-0.3%磷酸水溶液(50∶50)；检测波长250 nm；流速1.0 mL·min-1；进样量10 μL；柱温30 ℃。
, 百拇医药
2.2 对照品溶液的制备 取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取土槿皮药材粉末(过3号筛)0.25 g，精密加入70%乙醇50 mL，称重，超声(功率360 W，频率40 kHz)处理45 min，取出放冷，用70%乙醇补足失重，经微孔滤膜(0.45 μm)滤过取续滤液即得。
2.4 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，按照2.1项下条件进样测定，结果3，3′-二-O-甲基鞣花酸色谱峰与前后杂质峰分离度均大于1.5，峰纯度因子为999.945，理论塔板数大于5 000。对照品溶液与供试品溶液色谱图见图1，2。
1.3，3′-二-O-甲基鞣花酸(图2同)。
图1 3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液HPLC图
, 百拇医药
Fig.1 3，3′-O-dimethylellagic acid standard solution HPLC chromatography
图2 供试品溶液HPLC图
Fig.2 The test solution HPLC chromatography
2.5 线性关系的考察 精密称取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品约10 mg，置200 mL量瓶，加甲醇溶解后定容至刻度得3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品储备液(约50 mg·L-1)。准确量取储备液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于7个10 mL量瓶中，用甲醇配成3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品系列溶液，注入高效液相色谱仪。以质量浓度(mg·L -1) 为横坐标，峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程。3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液的标准曲线为Y=77.33X+7.904，r =0.999 5，结果表明3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液质量浓度在1.00～25.0 mg·L -1与峰面积呈良好线性关系。, http://www.100md.com(陈丽斯 区嘉菊 李书渊 陆颂规)
[通信作者] *陆颂规，高级工程师，主要从事中药研制工作，Tel：(020)81157722，E-mail：lsg0518@sohu.com
[作者简介] 陈丽斯，助理工程师，主要从事中药研制工作，Tel：13823402162，E-mail：lingengxuan@sina.com
[摘要] 土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus的干燥树皮，是外用杀菌止痒药复方土槿皮酊的原料药材。目前土槿皮药材质量标准收载于《广东省中药材标准》(第2册)，但其质量标准中仅有薄层鉴别项而无含量测定项，未能更有效地监控土槿皮药材的质量。该文首次建立反相高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸峰，并用外标法计算其含量，结果在确定的色谱条件下，目标成分峰与相邻杂质峰达到有效分离，3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液质量浓度在1.00～25.0 mg·L-1时峰面积呈良好线性关系，标准曲线为Y=77.33X+7.904，r=0.999 5；平均回收率为101.0%，RSD为1.3%。采用高效液相色谱法测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸的含量，所建立的方法操作步骤简单，稳定性和重复性好，准确度高，可靠性强，能为更有效监控土槿皮药材质量提供了有力的技术支持。
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[关键词] 土槿皮；药材监控；3，3′-二-O-甲基鞣花酸
土槿皮为桃金娘科植物水翁Cleistocalyx operculatus (Roxb.) Merr. et Perry的干燥树皮。历代本草对其记载较少，可在《生草药性备要》、《本草求原》和《岭南采药录》找到其较早的记载，其入药首见于清·何克谏著的《生草药性备要》[1]。《中药大辞典》、《广东中药志》、《中华本草》均将其收录入药，味苦、辛，性凉，功能清热解毒、燥湿、杀虫，主治脚气湿烂、湿疹、疥癣，疳疮，肾囊痈，烧烫伤[2]。自清至今，土槿皮用于杀虫、治癣有近300年的应用历史[3]，并有研究对其抗菌化合物进行分离与鉴定。现代土槿皮药材标准收载于《广东省中药材标准》(第2册)，由于其质量标准过于简单，仅有薄层鉴别项而无含量测定项[4]，故本文制订一种测定土槿皮药材中3，3′-二-O-甲基鞣花酸含量的方法，旨在为土槿皮药材质量监控提供有效的技术支持。本次实验所用的含量测定指标性物质3，3′-二-O-甲基鞣花酸存在于土槿皮中，属于鞣花酸衍生物的一种，资料表明，鞣花酸具有抗氧化性、抗癌变、抗诱变[5]、抗突变作用，还兼备抗菌、抗病毒作用[6]，被广泛应用于食品、医药医疗和化妆品等领域[7]。
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1 材料
1.1 仪器 Agilent 1260高效液相色谱系统(包括G1311C四元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G1315D DAD检测器和ChemStation色谱工作站)。
1.2 药材与试剂 3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品(含量98%，深圳市美荷生物科技有限公司)；土槿皮对照药材(中国食品药品检定研究院，批号1821-0301)；土槿皮药材(批号100602-2，110601-1，110601-2)产地为广西，取于广州白云山敬修堂药业股份有限公司，经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定为桃金娘科植物水翁C. operculatus的干燥树皮；含量测定用甲醇为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP80A (4.6 mm×250 mm，4 μm)；流动相甲醇-0.3%磷酸水溶液(50∶50)；检测波长250 nm；流速1.0 mL·min-1；进样量10 μL；柱温30 ℃。
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2.2 对照品溶液的制备 取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取土槿皮药材粉末(过3号筛)0.25 g，精密加入70%乙醇50 mL，称重，超声(功率360 W，频率40 kHz)处理45 min，取出放冷，用70%乙醇补足失重，经微孔滤膜(0.45 μm)滤过取续滤液即得。
2.4 专属性试验 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，按照2.1项下条件进样测定，结果3，3′-二-O-甲基鞣花酸色谱峰与前后杂质峰分离度均大于1.5，峰纯度因子为999.945，理论塔板数大于5 000。对照品溶液与供试品溶液色谱图见图1，2。
1.3，3′-二-O-甲基鞣花酸(图2同)。
图1 3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液HPLC图
, 百拇医药
Fig.1 3，3′-O-dimethylellagic acid standard solution HPLC chromatography
图2 供试品溶液HPLC图
Fig.2 The test solution HPLC chromatography
2.5 线性关系的考察 精密称取3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品约10 mg，置200 mL量瓶，加甲醇溶解后定容至刻度得3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品储备液(约50 mg·L-1)。准确量取储备液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于7个10 mL量瓶中，用甲醇配成3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品系列溶液，注入高效液相色谱仪。以质量浓度(mg·L -1) 为横坐标，峰面积A为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程。3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液的标准曲线为Y=77.33X+7.904，r =0.999 5，结果表明3，3′-二-O-甲基鞣花酸对照品溶液质量浓度在1.00～25.0 mg·L -1与峰面积呈良好线性关系。, http://www.100md.com(陈丽斯 区嘉菊 李书渊 陆颂规)