2.5 心肌细胞接种、分组及MI-RI模型的制备

    调大鼠心肌细胞H9c2密度为 8×104个/mL，接种于96孔培养板，每孔接种200 μL；调细胞密度为5×104个/mL，接种于6 孔培养板，每孔接种2 mL。培养2～3 d，待细胞覆盖率达到80%～ 90%时进行试验。

    心肌细胞MI-RI模型的制备：更换正常细胞培养液为等量的“缺血液”，置CO2培养箱中孵育2 h，造成细胞缺血。再将“缺血液”换为正常细胞培养液，孵育24 h，对细胞造成再灌注损伤。

    考察四逆汤及缺甘草四逆汤对心肌细胞MI-RI造模后损伤的作用及细胞培养液的分析，取心肌细胞随机分为4组，每组6复孔。试验分组如下：正常对照组，常规培养，细胞培养过程中不予任何干预；MI-RI模型组，造模后，加含10%空白血清的培养基；四逆汤组，造模后，加含10%四逆汤组大鼠血清的培养基；缺甘草四逆汤组，造模后，加含10%缺甘草四逆汤组大鼠血清的培养基。

    MTT 法检测各组细胞存活率及生化指标，结果见表1。收集各组细胞培养液于-20 ℃密封保存待测。

    2.6 四逆汤(缺甘草与否)对MI-RI心肌细胞的作用

    2.6.1 心肌细胞形态学观察 心肌细胞接种于6孔培养板中分别经过上述各组所述方法处理后 ......