羊脂油对淫羊藿活性黄酮自组装胶束模拟形成的影响(1)
[摘要]该文通过模拟人体内环境，研究羊脂油作用下淫羊藿活性黄酮自组装胶束的模拟形成，同时研究了不同产地(青海、江苏、安徽)、不同来源(山羊和绵羊)、不同部位(肚子油和尾巴油)的12批羊脂油以及羊脂油中主要脂肪酸类成分(硬脂酸、棕榈酸、油酸)对淫羊藿活性黄酮自组装胶束形成的影响。结果表明在羊脂油作用下，模拟形成的胶束呈分散状态，类球形且表面光滑。以粒径、电位、包封率、载药量等为指标对制得的胶束进行考察，发现产地为青海的绵羊制得的胶束较稳定，包封率较高。羊脂油中3种主要脂肪酸类成分能促进淫羊藿活性黄酮自组装胶束的形成，但羊脂油整体作用效果更好。以上研究证实羊脂油促进了淫羊藿活性黄酮自组装胶束的模拟形成，为进一步研究其作为淫羊藿炮制辅料的增效作用，促进淫羊藿活性黄酮的吸收奠定了基础。
[关键词]羊脂油；自组装胶束；炙淫羊藿；活性黄酮；脂肪酸类成分
淫羊藿为我国传统的补益中药，历代本草均有记载。药典记载其具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用[1]。淫羊藿的有效成分主要是黄酮类化合物，如淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ等。传统炮制理论认为，淫羊藿经羊脂油炙后，可增强温肾助阳的作用[2]。本课题组前期研究发现，羊脂油本身含有大量脂肪酸类成分，如油酸、硬脂酸、棕榈酸、甘油酯等，这些脂肪酸类成分具有脂肪长链以及表面活性，可以促进形成胶束、囊泡等多种药物载体的超分子自组装体结构。而人体内固有的胆汁酸或盐具有亲水面和疏水面，是一种天然的生物表面活性剂。胆汁酸盐可与脂类如磷脂、甘油酯、脂肪酸以及其他表面活性剂形成混合胶束作为药物载体，促进药物的吸收[3-5] 。因此，笔者提出炙淫羊藿中炮制辅料“羊脂油”的作用机制假说：炙淫羊藿口服进入体内，羊脂油促进了胶束的自组装形成，增加了活性黄酮的溶解度，提高了活性黄酮的肠吸收，从而发挥了其增效作用[6-9]。
, http://www.100md.com
因此，本文选择淫羊藿活性黄酮淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ以及总黄酮为研究对象，通过模拟人体胃肠道内环境，研究在羊脂油作用下淫羊藿黄酮成分自组装胶束的形成，并选择不同来源、产地、部位的羊脂油以及羊脂油主要脂肪酸类成分考察其对淫羊藿黄酮自组装胶束模拟形成的影响，为进一步研究其作为淫羊藿炮制辅料的增效作用，促进淫羊藿活性黄酮的吸收奠定基础。
1 材料
Agilent 1200系列高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器(Agilent公司，美国)；激光粒度分析仪(Zetasizer-Nano-ZS型，英国Malvern公司)；透射电子显微镜(JEM-1010，日本电子公司JEOL)；METTLER AB135-S型电子天平(1/10万，梅特勒-托利多仪器有限公司)；85-2型恒温磁力搅拌器(上海司乐仪器厂)；Milli-Q纯水机(Millipore，美国)；KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
, 百拇医药
淫羊藿苷(西安小草植物科技有限公司，批号xc20130628，纯度>98%)；宝藿苷Ⅰ(自制，纯度>98%)；淫羊藿总黄酮(西安小草植物科技有限公司，批号20130628，纯度>80%)；羊脂油共12批(201201-201212)，分别采自安徽(4批)、江苏(4批)、青海(4批)；油酸(上海凌峰化学试剂有限公司)；硬脂酸(国药集团化学试剂有限公司)；棕榈酸(成都市科龙化工试剂厂)；乙腈为色谱纯，水为纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ高效液相色谱条件：色谱柱为Phenomenex ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相乙腈-水(30∶70)；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1；检测波长270 nm；进样体积20 μL。淫羊藿总黄酮紫外分光光度法条件：甲醇为空白对照，吸收波长为270 nm。
, 百拇医药
2.2 标准曲线的制备
2.2.1 淫羊藿苷标准曲线的制备 精密称取淫羊藿苷对照品10.15 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为406 mg·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取淫羊藿苷对照品储备液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得10.15，20.3，40.6，81.2，121.8，163.6，203.0 mg·L-1的系列对照品溶液。按2.1项下色谱条件进样测定，以淫羊藿苷峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 728X-39.18，r=0.999 8，表明淫羊藿苷在10.15～203.00 mg·L-1与峰面积呈良好线性关系。
2.2.2 宝藿苷I标准曲线的制备 精密称取宝藿苷I对照品5.00 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为200 mg·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取宝藿苷I对照品储备液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得5.00，10.00，20.00，40.00，60.00，80.00，100.00 mg·L-1的系列对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以宝藿苷I峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=32 369X-2.895 5，r=0.999 8，淫羊藿苷在5.00～100.00 mg·L-1与峰面积呈良好线性关系。
2.2.3 淫羊藿总黄酮标准曲线的制备 按照药典方法，选取淫羊藿苷为对照品。精密称取淫羊藿苷对照品3 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.12 g·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取淫羊藿苷对照品储备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.006，0.012，0.018，0.024，0.030，0.036，0.042 g·L-1的系列对照品溶液，以甲醇为空白，用紫外分光光度计在270 nm处测定吸光度，以浓度C与吸光度A进行线性回归，得回归方程A=6.922 6C+0.024 9，r=0.999 7。, 百拇医药(李杰 孙娥 张振海 蒋俊 徐凤娟 贾晓斌)
[关键词]羊脂油；自组装胶束；炙淫羊藿；活性黄酮；脂肪酸类成分
淫羊藿为我国传统的补益中药，历代本草均有记载。药典记载其具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用[1]。淫羊藿的有效成分主要是黄酮类化合物，如淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ等。传统炮制理论认为，淫羊藿经羊脂油炙后，可增强温肾助阳的作用[2]。本课题组前期研究发现，羊脂油本身含有大量脂肪酸类成分，如油酸、硬脂酸、棕榈酸、甘油酯等，这些脂肪酸类成分具有脂肪长链以及表面活性，可以促进形成胶束、囊泡等多种药物载体的超分子自组装体结构。而人体内固有的胆汁酸或盐具有亲水面和疏水面，是一种天然的生物表面活性剂。胆汁酸盐可与脂类如磷脂、甘油酯、脂肪酸以及其他表面活性剂形成混合胶束作为药物载体，促进药物的吸收[3-5] 。因此，笔者提出炙淫羊藿中炮制辅料“羊脂油”的作用机制假说：炙淫羊藿口服进入体内，羊脂油促进了胶束的自组装形成，增加了活性黄酮的溶解度，提高了活性黄酮的肠吸收，从而发挥了其增效作用[6-9]。
, http://www.100md.com
因此，本文选择淫羊藿活性黄酮淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ以及总黄酮为研究对象，通过模拟人体胃肠道内环境，研究在羊脂油作用下淫羊藿黄酮成分自组装胶束的形成，并选择不同来源、产地、部位的羊脂油以及羊脂油主要脂肪酸类成分考察其对淫羊藿黄酮自组装胶束模拟形成的影响，为进一步研究其作为淫羊藿炮制辅料的增效作用，促进淫羊藿活性黄酮的吸收奠定基础。
1 材料
Agilent 1200系列高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器(Agilent公司，美国)；激光粒度分析仪(Zetasizer-Nano-ZS型，英国Malvern公司)；透射电子显微镜(JEM-1010，日本电子公司JEOL)；METTLER AB135-S型电子天平(1/10万，梅特勒-托利多仪器有限公司)；85-2型恒温磁力搅拌器(上海司乐仪器厂)；Milli-Q纯水机(Millipore，美国)；KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
, 百拇医药
淫羊藿苷(西安小草植物科技有限公司，批号xc20130628，纯度>98%)；宝藿苷Ⅰ(自制，纯度>98%)；淫羊藿总黄酮(西安小草植物科技有限公司，批号20130628，纯度>80%)；羊脂油共12批(201201-201212)，分别采自安徽(4批)、江苏(4批)、青海(4批)；油酸(上海凌峰化学试剂有限公司)；硬脂酸(国药集团化学试剂有限公司)；棕榈酸(成都市科龙化工试剂厂)；乙腈为色谱纯，水为纯净水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ高效液相色谱条件：色谱柱为Phenomenex ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相乙腈-水(30∶70)；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1；检测波长270 nm；进样体积20 μL。淫羊藿总黄酮紫外分光光度法条件：甲醇为空白对照，吸收波长为270 nm。
, 百拇医药
2.2 标准曲线的制备
2.2.1 淫羊藿苷标准曲线的制备 精密称取淫羊藿苷对照品10.15 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为406 mg·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取淫羊藿苷对照品储备液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得10.15，20.3，40.6，81.2，121.8，163.6，203.0 mg·L-1的系列对照品溶液。按2.1项下色谱条件进样测定，以淫羊藿苷峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=13 728X-39.18，r=0.999 8，表明淫羊藿苷在10.15～203.00 mg·L-1与峰面积呈良好线性关系。
2.2.2 宝藿苷I标准曲线的制备 精密称取宝藿苷I对照品5.00 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为200 mg·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取宝藿苷I对照品储备液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得5.00，10.00，20.00，40.00，60.00，80.00，100.00 mg·L-1的系列对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以宝藿苷I峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=32 369X-2.895 5，r=0.999 8，淫羊藿苷在5.00～100.00 mg·L-1与峰面积呈良好线性关系。
2.2.3 淫羊藿总黄酮标准曲线的制备 按照药典方法，选取淫羊藿苷为对照品。精密称取淫羊藿苷对照品3 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为0.12 g·L-1的淫羊藿苷储备液。分别精密量取淫羊藿苷对照品储备液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.006，0.012，0.018，0.024，0.030，0.036，0.042 g·L-1的系列对照品溶液，以甲醇为空白，用紫外分光光度计在270 nm处测定吸光度，以浓度C与吸光度A进行线性回归，得回归方程A=6.922 6C+0.024 9，r=0.999 7。, 百拇医药(李杰 孙娥 张振海 蒋俊 徐凤娟 贾晓斌)