巢式病例对照设计在痰热清注射液过敏反应机制研究中的应用举隅(1)
[收稿日期]2014-07-04
[基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09502-030)；国家中医药管理局中医药行业科研专项(200907001-5-6)
[通信作者]*王连心，副研究员，博士，Tel：(010)64014411-3316，E-mail：wanglianxin_tcm@126.com
[作者简介]谢鹏扬，博士，副教授，研究方向为运筹学与系统工程，Tel：13818566877， E-mail： xiepengyang@163.com
[摘要]该文从痰热清注射液从上市后临床应用着眼，采用前瞻性、多中心、大样本、注册登记式临床安全性监测嵌套巢式病例对照设计，检测与分析过敏反应患者相关血液指标，探讨其过敏反应可能的机制。共监测使用痰热清注射液的患者3 006例，出现不良反应的患者3例，其中2例为过敏反应。每例过敏反应患者，按1∶4匹配4例未发生不良反应的患者作为对照组，同时纳入5例健康志愿者组成健康组，对各组之间总IgE，IgA，IgG，C3，C4，IFN-g，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10等过敏反应相关检测指标进行比较。基于现有的研究数据发现痰热清注射液的过敏反应可能为由IgE介导的Ⅰ型过敏反应，这也为促进临床安全合理用药起到促进作用。
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[关键词]痰热清注射液；注册登记研究；巢式病例对照；过敏反应机制；人体免疫毒理学
痰热清注射液常用于风温肺热病痰热阻肺证，偶有过敏反应，可见头晕、恶心、呕吐、全身发红、瘙痒或皮疹[1]。过敏反应的发生，可能也由于痰热清注射液药物组成大多为清热解毒功效的中药，较易导致过敏；另一方面由于其适用患者多罹患感染性疾病，病毒入侵使机体处于应激状态，患者多出现自身免疫机制异常而易引起过敏[2]。对包括痰热清注射液在内的中药注射剂过敏反应机制的研究尚在不断进展中[3]，本文从痰热清注射液从上市后临床应用真实世界着眼，采取大样本、多中心、前瞻性、注册登记式临床安全性监测嵌套前瞻性巢式病例对照设计方法[4]，旨在探讨痰热清注射液过敏反应可能的机制，为促进临床安全合理用药起到促进作用。
1材料与方法
1.1研究设计根据《生产企业药品重点监测工作指南》[5]中主动收集与重点监测药品使用安全性的相关要求，监测自2012年9月—2013年10月，来自长春中医药大学附属医院、首都医科大学附属北京佑安医院、安徽中医药大学第一附属医院、长沙市第一医院使用痰热清注射液的3 006例患者。如果发生1例过敏反应患者，按性别、年龄±5岁、用药季节、药品批次等因素，按1∶4匹配4例未发生不良反应的患者作为对照组，同时纳入5例健康志愿者组成健康组，对各组之间总IgE，IgA，IgG，C3，C4，IFN-g，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10等过敏反应相关检测指标进行比较[6]。
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1.2过敏反应判断标准采用美国国立变态反应和感染性疾病研究所(NIAID)与食物过敏及急性全身过敏反应联盟(FAAN)在第2次专题讨论会上制定的急性全身过敏反应的诊断标准[7]。
1.3采集血液样本采集被患者血液样本时，需要在其本人或合法代理人清醒、正常的精神状态下，详细、明确告知采血目的、用途、方式、采血量以及可能存在的风险等，不干涉患者决定，如果患者同意采血，请其仔细阅读知情同意书，签署《血样采集知情同意书》。或在有证人的情况下，将知情同意书的内容念给其听，同意后亲自签字或按手印。同时告知患者的隐私权将被严格保密，未经同意不会泄漏有关信息[8]。
采血使用的医疗用品符合GB15980-1995标准，采血前，监测者核对监测表编号及被采血人姓名、性别；然后，以无菌操作法进行静脉采血；采血后，血样在室温放置30 min以上，使血清析出；以3 000 r·min-1离心5 min，并以无菌吸管将血清分别吸入冻存管保存，同时监测者填写好血清采集登记相关信息。
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采用条形码技术[9]，每份标识标签中包含被采血患者标识、标本类别标识、过敏类别标识和采集日期标识4部分，被采血患者具有唯一的条形码标识，并且，为保护患者隐私，标识上不显示被采血患者姓名。条形码标签为白色并全部与血清冻存管管壁牢固结合；标签信息采用实体黑色字体，通过打印或印刷产生；标签材质防水、耐低温、耐磨损。标识通过贴签实现，为使发生错误的潜在危险降低到最小，负责贴签的人员皆经过充分培训和评估，所有标本的标签都存档保留。
血液样本贴好标签后，立即置于-20 ℃或更低温度条件中，需说明的是，血样在-20 ℃条件时可贮存2个月，在-80 ℃时可贮存6个月，在液氮中可永久保存[15]。血样入库、出库或使用标本时，有专门的管理员书面填写、记录清楚相关信息及过程。传染性疾病血样单独设库存放于污染区；非传染性疾病血样，也可能存在未知传染性病原体，因而同视为传染物对待。
1.4血样检测白介素试剂(BD CBA Human Th1/Th2 Cytokine Kit II)(Becton Dickinson公司， 2314785)；抗人IgA抗体(山羊)(2401572)、抗人IgG抗体(山羊)(2401617)、抗人C3抗体抗体(山羊)(2400734)、抗人C4抗体(山羊)(2400863号)、免疫球蛋白E检测试剂盒(电化学发光法)(168340)、TRIS缓冲液、聚乙二醇均购于德国罗氏诊断有限公司。
检测仪器：全自动生化分析仪(ROCHE COBAS C 311)，BD FACSCalibur流式细胞仪，罗氏cobas e601。, http://www.100md.com(谢鹏扬 谢雁鸣 王连心 常艳鹏 刘绍勇)
[基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09502-030)；国家中医药管理局中医药行业科研专项(200907001-5-6)
[通信作者]*王连心，副研究员，博士，Tel：(010)64014411-3316，E-mail：wanglianxin_tcm@126.com
[作者简介]谢鹏扬，博士，副教授，研究方向为运筹学与系统工程，Tel：13818566877， E-mail： xiepengyang@163.com
[摘要]该文从痰热清注射液从上市后临床应用着眼，采用前瞻性、多中心、大样本、注册登记式临床安全性监测嵌套巢式病例对照设计，检测与分析过敏反应患者相关血液指标，探讨其过敏反应可能的机制。共监测使用痰热清注射液的患者3 006例，出现不良反应的患者3例，其中2例为过敏反应。每例过敏反应患者，按1∶4匹配4例未发生不良反应的患者作为对照组，同时纳入5例健康志愿者组成健康组，对各组之间总IgE，IgA，IgG，C3，C4，IFN-g，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10等过敏反应相关检测指标进行比较。基于现有的研究数据发现痰热清注射液的过敏反应可能为由IgE介导的Ⅰ型过敏反应，这也为促进临床安全合理用药起到促进作用。
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[关键词]痰热清注射液；注册登记研究；巢式病例对照；过敏反应机制；人体免疫毒理学
痰热清注射液常用于风温肺热病痰热阻肺证，偶有过敏反应，可见头晕、恶心、呕吐、全身发红、瘙痒或皮疹[1]。过敏反应的发生，可能也由于痰热清注射液药物组成大多为清热解毒功效的中药，较易导致过敏；另一方面由于其适用患者多罹患感染性疾病，病毒入侵使机体处于应激状态，患者多出现自身免疫机制异常而易引起过敏[2]。对包括痰热清注射液在内的中药注射剂过敏反应机制的研究尚在不断进展中[3]，本文从痰热清注射液从上市后临床应用真实世界着眼，采取大样本、多中心、前瞻性、注册登记式临床安全性监测嵌套前瞻性巢式病例对照设计方法[4]，旨在探讨痰热清注射液过敏反应可能的机制，为促进临床安全合理用药起到促进作用。
1材料与方法
1.1研究设计根据《生产企业药品重点监测工作指南》[5]中主动收集与重点监测药品使用安全性的相关要求，监测自2012年9月—2013年10月，来自长春中医药大学附属医院、首都医科大学附属北京佑安医院、安徽中医药大学第一附属医院、长沙市第一医院使用痰热清注射液的3 006例患者。如果发生1例过敏反应患者，按性别、年龄±5岁、用药季节、药品批次等因素，按1∶4匹配4例未发生不良反应的患者作为对照组，同时纳入5例健康志愿者组成健康组，对各组之间总IgE，IgA，IgG，C3，C4，IFN-g，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10等过敏反应相关检测指标进行比较[6]。
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1.2过敏反应判断标准采用美国国立变态反应和感染性疾病研究所(NIAID)与食物过敏及急性全身过敏反应联盟(FAAN)在第2次专题讨论会上制定的急性全身过敏反应的诊断标准[7]。
1.3采集血液样本采集被患者血液样本时，需要在其本人或合法代理人清醒、正常的精神状态下，详细、明确告知采血目的、用途、方式、采血量以及可能存在的风险等，不干涉患者决定，如果患者同意采血，请其仔细阅读知情同意书，签署《血样采集知情同意书》。或在有证人的情况下，将知情同意书的内容念给其听，同意后亲自签字或按手印。同时告知患者的隐私权将被严格保密，未经同意不会泄漏有关信息[8]。
采血使用的医疗用品符合GB15980-1995标准，采血前，监测者核对监测表编号及被采血人姓名、性别；然后，以无菌操作法进行静脉采血；采血后，血样在室温放置30 min以上，使血清析出；以3 000 r·min-1离心5 min，并以无菌吸管将血清分别吸入冻存管保存，同时监测者填写好血清采集登记相关信息。
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采用条形码技术[9]，每份标识标签中包含被采血患者标识、标本类别标识、过敏类别标识和采集日期标识4部分，被采血患者具有唯一的条形码标识，并且，为保护患者隐私，标识上不显示被采血患者姓名。条形码标签为白色并全部与血清冻存管管壁牢固结合；标签信息采用实体黑色字体，通过打印或印刷产生；标签材质防水、耐低温、耐磨损。标识通过贴签实现，为使发生错误的潜在危险降低到最小，负责贴签的人员皆经过充分培训和评估，所有标本的标签都存档保留。
血液样本贴好标签后，立即置于-20 ℃或更低温度条件中，需说明的是，血样在-20 ℃条件时可贮存2个月，在-80 ℃时可贮存6个月，在液氮中可永久保存[15]。血样入库、出库或使用标本时，有专门的管理员书面填写、记录清楚相关信息及过程。传染性疾病血样单独设库存放于污染区；非传染性疾病血样，也可能存在未知传染性病原体，因而同视为传染物对待。
1.4血样检测白介素试剂(BD CBA Human Th1/Th2 Cytokine Kit II)(Becton Dickinson公司， 2314785)；抗人IgA抗体(山羊)(2401572)、抗人IgG抗体(山羊)(2401617)、抗人C3抗体抗体(山羊)(2400734)、抗人C4抗体(山羊)(2400863号)、免疫球蛋白E检测试剂盒(电化学发光法)(168340)、TRIS缓冲液、聚乙二醇均购于德国罗氏诊断有限公司。
检测仪器：全自动生化分析仪(ROCHE COBAS C 311)，BD FACSCalibur流式细胞仪，罗氏cobas e601。, http://www.100md.com(谢鹏扬 谢雁鸣 王连心 常艳鹏 刘绍勇)