2.4 PCR产物检测 在PCR扩增产物中加入2 μL 100× SYBR Green I于365 nm紫外波长下检测荧光，出现强烈绿色荧光则表明有扩增。

    3 结果与分析

    3.1 碱裂解法提取金银花类材料DNA 由于碱裂解法提取的DNA无法通过凝胶电泳检测^[8-9]，故本文使用通用引物进行扩增，以检测DNA提取效果。1%琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，利用trnL F/trnF R引物，忍冬及其9个同属混淆品均获得约1 050 bp大小的扩增产物，与trnL-trnF片段大小一致见图1，说明碱裂解法提取的DNA可以满足PCR反应的要求。

    3.2 PCR反应条件的确定 与AS-PCR一样[7， 10]，快速位点特异性PCR要求严格的退火温度、循环数，循环数过高或退火温度过低均会导致假阳性的分型结果。为获得最适反应条件，本文依次分析了退火温度、循环数、变性温度、变性和退火时间、Taq酶种类及不同的PCR仪对PCR反应稳定性的影响。结果表明，使用快速AS-PCR鉴别引物扩增时 ......