精氨酸对蚂蟥诱食效应的初步研究(1)
[摘要]以蚂蟥Whitmania pigra为试验动物，在排除振动、底物影响的前提下，以黄原胶作为饲料底物，观察不同浓度精氨酸对蚂蟥的诱食效应。结果表明，0.3%精氨酸对蚂蟥有明显的诱食作用，与蚂蟥天然饲料螺蛳体液中精氨酸质量分数2.97 mg·g-1相接近。
[关键词]蚂蟥； 精氨酸； 诱食
水蛭作为中药始载于《神农本草经》， 《中国药典》(2010年版)收载了蚂蟥Whitmania pigra Whitman、柳叶蚂蟥Wh. acranulata Whitman和水蛭Hirudo nipponica Whitman) [1]3种作为药材水蛭的动物基原，本项目的研究对象为蚂蟥，又称宽体金线蛭，隶属于环节动物门Annelida蛭纲Hirudinea无吻蛭目Arhynchobdellida黄蛭科Haemopidae[2]。
随着研究工作的深入，水蛭的野生资源日益枯竭，因此水蛭的人工养殖成了当前迫在眉睫的任务，但有关蚂蟥人工养殖的基础性研究少有报道，主要集中在呼吸生理、繁殖条件、摄食规律以及分子生物学等方面[3-7]。虽然蚂蟥人工养殖目前已取得了阶段性的成功并进行了一定规模的推广，但在实际生产中发现仅靠给蚂蟥饲喂天然饵料已极大程度限制其规模化生产，因此对蚂蟥人工饲料的研究迫在眉睫，而能否引起动物摄食是饲料研究的首要任务。
, http://www.100md.com
研究表明含氮物质会刺激水产动物的嗅味觉，影响水产动物的摄食活动，其中氨基酸类是水产动物摄食活动的强刺激剂。荻野珍吉曾指出鱼类的摄食刺激物中主要活性成分是氨基酸 [8]。刘焕亮等也认为氨基酸对鱼类都有明显的诱食作用，如甘氨酸、精氨酸、赖氨酸等[9]。氨基酸的酸碱性影响其对鱼类的诱食活性，一般认为，肉食性鱼类对碱性和中性氨基酸敏感[10]，蚂蟥的天然饲料为螺蛳，前期试验发现螺蛳体液和体肉中均含有丰富的精氨酸[11]，且杨潼研究发现1 mmol·L-1的L-精氨酸对日本医蛭H. nipponia和湖北牛蛭Poecilobdella hubeiensis有诱食作用[12]，故本试验选用碱性氨基酸精氨酸作为试验诱食剂，探讨不同浓度精氨酸对蚂蟥的诱食作用，为今后蚂蟥饲料研究和生产提供科学依据。
1 材料
蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供， 经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Wh. pigra；精氨酸、黄原胶、螺蛳。
, 百拇医药
匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，756CRT 紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，FA1104分析天平(上海天平仪厂)，835-50型氨基酸分析仪(日立835-50型)。
2 方法
2.1 试验设计
以培养皿底部正中心为原点裁剪出直径5 cm的空白区域，用1层医用消毒纱布包裹培养皿底部覆盖住底部的空白区域，并用橡皮筋固定。诱食试验时，先将试验材料放入培养皿，再将培养皿放入装有10 cm高充分曝气24 h水的玻璃缸中，规定底部空白区域即为诱食有效区，每组取10 条健康蚂蟥放入玻璃缸中，共6个重复，试验为60 min，每5 min统计进入诱食有效区蚂蟥的条数(图1)。对照组(CK)培养皿中不放东西[13]。
2.2 诱食效应
, http://www.100md.com
2.2.1 排除活体螺蛳振动刺激对试验产生的影响 取3 只鲜活螺蛳和3 只鲜杀的螺蛳(将鲜活螺蛳放入-20 ℃冰箱中冷冻3 h)分别放入2 个培养皿中，进行试验。
2.2.2 底物(黄原胶)浓度的选择及其对试验产生的影响 精确称取黄原胶，配成0.5%，1.0%，1.5%，2.0%的溶液，加热使其全部溶解，自然冷却(发现0.5%的溶液太稀不凝固，2.0%的则凝固硬度太大，故舍去0.5%，2.0%组)。分别将10 mL 1.0%，1.5%的黄原胶放入培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥诱食效果。
按上法配制1.0%，1.5%黄原胶溶液，冷却后加入相同量螺蛳提取液，分别取加了螺蛳提取液的黄原胶10 mL放入2 个培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥诱食效果，筛选最适合的黄原胶浓度。
2.2.3 精氨酸浓度的选择 根据以往实验结果，精氨酸在螺蛳体液质量分数为2.97 mg·g-1，全肉则为7.09 mg·g-1[11]，结合2.2.2试验结果，筛选并配制适宜浓度的黄原胶，分成6组，每组加入不同浓度(0.0%，0.1%，0.3%，0.5%，0.7%，0.9%)精氨酸，每组取10 mL分别放入6 个培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥的诱食作用。
, 百拇医药
2.3 数据分析
统计60 min内蚂蟥进入有效区的总条数，每组重复6 次，实验数据以±s表示。试验数据先用 Microsoft Excel 作初步处理， 然后采用 SPSS 18.0 软件包( One-Way ANOVA，LSD) 进行分析。
3 结果与分析
3.1 活体螺蛳振动刺激对蚂蟥摄食的影响
活体螺蛳和死螺蛳对蚂蟥摄食的影响无显著差异，可以排除活体螺蛳振动因素对蚂蟥摄食产生的影响(图2)。
3.2 不同浓度黄原胶对蚂蟥诱食的影响
1.0%，1.5%黄原胶和空白对照组对蚂蟥摄食均无显著性差异，说明1.0%，1.5%的黄原胶不吸引蚂蟥，可以排除底物黄原胶对蚂蟥摄食的影响(图3)。
与空白组相比，含螺蛳体液的组别对蚂蟥有显著诱食作用(P<005)，其中底物黄原胶10%组别诱食效果优于15%组，且具有显著性差异(P<005)，可以筛选10%黄原胶做饲料的底物(图4)。, http://www.100md.com(王嘉 郭巧生 史红专 刘宏 钱伟伦 段舒予 耿天华)
[关键词]蚂蟥； 精氨酸； 诱食
水蛭作为中药始载于《神农本草经》， 《中国药典》(2010年版)收载了蚂蟥Whitmania pigra Whitman、柳叶蚂蟥Wh. acranulata Whitman和水蛭Hirudo nipponica Whitman) [1]3种作为药材水蛭的动物基原，本项目的研究对象为蚂蟥，又称宽体金线蛭，隶属于环节动物门Annelida蛭纲Hirudinea无吻蛭目Arhynchobdellida黄蛭科Haemopidae[2]。
随着研究工作的深入，水蛭的野生资源日益枯竭，因此水蛭的人工养殖成了当前迫在眉睫的任务，但有关蚂蟥人工养殖的基础性研究少有报道，主要集中在呼吸生理、繁殖条件、摄食规律以及分子生物学等方面[3-7]。虽然蚂蟥人工养殖目前已取得了阶段性的成功并进行了一定规模的推广，但在实际生产中发现仅靠给蚂蟥饲喂天然饵料已极大程度限制其规模化生产，因此对蚂蟥人工饲料的研究迫在眉睫，而能否引起动物摄食是饲料研究的首要任务。
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研究表明含氮物质会刺激水产动物的嗅味觉，影响水产动物的摄食活动，其中氨基酸类是水产动物摄食活动的强刺激剂。荻野珍吉曾指出鱼类的摄食刺激物中主要活性成分是氨基酸 [8]。刘焕亮等也认为氨基酸对鱼类都有明显的诱食作用，如甘氨酸、精氨酸、赖氨酸等[9]。氨基酸的酸碱性影响其对鱼类的诱食活性，一般认为，肉食性鱼类对碱性和中性氨基酸敏感[10]，蚂蟥的天然饲料为螺蛳，前期试验发现螺蛳体液和体肉中均含有丰富的精氨酸[11]，且杨潼研究发现1 mmol·L-1的L-精氨酸对日本医蛭H. nipponia和湖北牛蛭Poecilobdella hubeiensis有诱食作用[12]，故本试验选用碱性氨基酸精氨酸作为试验诱食剂，探讨不同浓度精氨酸对蚂蟥的诱食作用，为今后蚂蟥饲料研究和生产提供科学依据。
1 材料
蚂蟥由南京农业大学中药材研究所提供， 经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Wh. pigra；精氨酸、黄原胶、螺蛳。
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匀浆机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，756CRT 紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，FA1104分析天平(上海天平仪厂)，835-50型氨基酸分析仪(日立835-50型)。
2 方法
2.1 试验设计
以培养皿底部正中心为原点裁剪出直径5 cm的空白区域，用1层医用消毒纱布包裹培养皿底部覆盖住底部的空白区域，并用橡皮筋固定。诱食试验时，先将试验材料放入培养皿，再将培养皿放入装有10 cm高充分曝气24 h水的玻璃缸中，规定底部空白区域即为诱食有效区，每组取10 条健康蚂蟥放入玻璃缸中，共6个重复，试验为60 min，每5 min统计进入诱食有效区蚂蟥的条数(图1)。对照组(CK)培养皿中不放东西[13]。
2.2 诱食效应
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2.2.1 排除活体螺蛳振动刺激对试验产生的影响 取3 只鲜活螺蛳和3 只鲜杀的螺蛳(将鲜活螺蛳放入-20 ℃冰箱中冷冻3 h)分别放入2 个培养皿中，进行试验。
2.2.2 底物(黄原胶)浓度的选择及其对试验产生的影响 精确称取黄原胶，配成0.5%，1.0%，1.5%，2.0%的溶液，加热使其全部溶解，自然冷却(发现0.5%的溶液太稀不凝固，2.0%的则凝固硬度太大，故舍去0.5%，2.0%组)。分别将10 mL 1.0%，1.5%的黄原胶放入培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥诱食效果。
按上法配制1.0%，1.5%黄原胶溶液，冷却后加入相同量螺蛳提取液，分别取加了螺蛳提取液的黄原胶10 mL放入2 个培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥诱食效果，筛选最适合的黄原胶浓度。
2.2.3 精氨酸浓度的选择 根据以往实验结果，精氨酸在螺蛳体液质量分数为2.97 mg·g-1，全肉则为7.09 mg·g-1[11]，结合2.2.2试验结果，筛选并配制适宜浓度的黄原胶，分成6组，每组加入不同浓度(0.0%，0.1%，0.3%，0.5%，0.7%，0.9%)精氨酸，每组取10 mL分别放入6 个培养皿中，同时设置一个空白培养皿作为对照组，观察对蚂蟥的诱食作用。
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2.3 数据分析
统计60 min内蚂蟥进入有效区的总条数，每组重复6 次，实验数据以±s表示。试验数据先用 Microsoft Excel 作初步处理， 然后采用 SPSS 18.0 软件包( One-Way ANOVA，LSD) 进行分析。
3 结果与分析
3.1 活体螺蛳振动刺激对蚂蟥摄食的影响
活体螺蛳和死螺蛳对蚂蟥摄食的影响无显著差异，可以排除活体螺蛳振动因素对蚂蟥摄食产生的影响(图2)。
3.2 不同浓度黄原胶对蚂蟥诱食的影响
1.0%，1.5%黄原胶和空白对照组对蚂蟥摄食均无显著性差异，说明1.0%，1.5%的黄原胶不吸引蚂蟥，可以排除底物黄原胶对蚂蟥摄食的影响(图3)。
与空白组相比，含螺蛳体液的组别对蚂蟥有显著诱食作用(P<005)，其中底物黄原胶10%组别诱食效果优于15%组，且具有显著性差异(P<005)，可以筛选10%黄原胶做饲料的底物(图4)。, http://www.100md.com(王嘉 郭巧生 史红专 刘宏 钱伟伦 段舒予 耿天华)