丹参双相载药乳剂的研制及其质量评价(1)
[摘要]探讨以乳剂同时载药丹参脂溶性与水溶性成分的可行性，为从制剂学方面综合利用丹参药效成分提供新思路。以丹参酮ⅡA，丹酚酸B为原料，大豆磷脂与帕洛沙姆188为混合乳化剂，甘油为等渗调节剂，采用星点设计-效应面法优选处方，高速剪切法制备初乳，续以高压均质机进行匀化，制备丹参双相载药静脉乳剂，进而考察其药剂学特性与稳定性。所制得产品外观为橙黄色乳状液，平均粒径241 nm，Zeta电位-35.3 mV，其中丹参酮ⅡA载药量为0.5 g·L-1，丹酚酸B载药量为1 g·L-1，长期留样稳定性良好。结果表明研制的乳剂可同时载药脂溶性成分丹参酮ⅡA，水溶性成分丹酚酸B，可为充分发挥丹参的药效奠定制剂学基础。
[关键词]丹参酮ⅡA；丹酚酸B；制备工艺；星点设计；质量评价
丹参酮ⅡA(tanshione ⅡA)、丹酚酸B(salvianolic acid B)是中药丹参的主要有效单体，2010年版《中国药典》丹参药材的指标成分。丹参酮ⅡA是丹参的脂溶性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、保护血管内皮细胞、抗肿瘤等多种活性作用[1-4]；丹酚酸B是丹参的代表性水溶性成分，具有改善缺血、缺氧所致心肌细胞损伤、抗氧化清除自由基、抗前列腺肿瘤、抗肝纤维化等多方面的心血管药理活性[5-8]。根据文献报道，丹参酮ⅡA和丹酚酸B联用可有效提高抗氧化、损伤心脏微血管内皮细胞的保护作用[9]，诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞[10]。然而，丹参酮ⅡA溶解度极低，严重影响了其普通制剂的生物利用度[11]。另一方面，乳剂作为一种水油两相的优良载体，可同时包载脂溶性和水溶性药物，有利于充分发挥丹参的治疗作用。为此，本研究拟探讨以乳剂同时载药丹参脂溶性与水溶性成分的可行性，为从制剂学方面综合利用丹参药效成分提供新思路。
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1 材料
EF-C5高压均质机(加拿大Avestin)；A-88组织捣碎匀浆机(江苏省金坛市医疗仪器厂)；LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；Malvern-3000粒径及Zeta电位测定仪(英国)。
丹参酮ⅡA(纯度99.1%，西安天丰生物科技有限公司)；丹参酮ⅡA对照品(中国食品药品检定研究院，批号110766-200716)；丹酚酸B(纯度98.2%，成都曼斯特生物科技有限公司)；丹酚酸B对照品(中国食品药品检定研究院，批号111562-201009)；注射用中链油(铁岭北亚药用油有限公司)；注射用大豆磷脂(上海太伟药业有限公司)；注射用甘油(汕头古汉紫光氨基酸有限公司)；帕洛沙姆188(PluronicF68，德国BASF)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
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2.1 丹参双相载药乳剂的制备
2.1.1 油相和乳化剂的筛选 在制剂处方中，油相作为溶解丹参酮ⅡA的载体，决定了其载药量。乳剂油相常用注射用大豆油、中链油、油酸乙酯等[12]。据此，称取适量丹参酮ⅡA，置具塞锥形瓶中，分别加入大豆油、中链油、混合油(大豆油-中链油1∶1)，于37 ℃恒温水浴振摇48 h平衡，使丹参酮ⅡA在油相中过饱和。精密称取过滤后的丹参酮ⅡA油溶液0.5 mL至50 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解，定容，过滤，取续滤液，按2.2.2项色谱条件测定各油相中丹参酮ⅡA的溶解度，其在注射用大豆油、中链油、混合油中的溶解度分别为5.97，12.16，9.58 g·L-1。因此，选择中链油作为油相。一般乳化剂在制剂中的主要作用是给予处方足够的乳化能力，因此药物在乳化剂中的溶解度不是筛选乳化剂的关键因素，而安全性和乳化能力才是选择乳化剂的主要因素。根据乳剂经典处方[13]，以阴离子型大豆磷脂为乳化剂，非离子型泊洛沙姆188为助乳化剂。
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2.1.2 星点设计优化处方 在预实验的基础上，初步确定注射用油为中链油， 大豆磷脂为乳化剂，泊洛沙姆188为助乳化剂，制得的乳剂外观均一，离心条件下稳定。在此基础上，主要考察注射用大豆磷脂用量(X1，%)、泊洛沙姆188用量(X2，%)和注射用中链油用量(X3，%)，并设定其用量范围为X1：0.6%～1.8%；X2：0.1%～0.5%；X3：10%～30%。采用3因素星点设计，以平均粒径(Y)为指标，见表1，测定结果见表2。
对实验数据进行二次多项式拟合，模型为Y=b0+b1X1+b2X2+b3X3+b11X12+b22X22+b33X32+b12X1X2+b23X2X3+b13X1X3，以此模型对数据进行拟合，得回归方程为Y=617.545-392.075X1-294.596X2-7.968X3+139.187X12+415.184X22+0.175X32-11.574X1X2+1.401X2X3+0.117X1X3(r=0.969 9)，根据拟合方程，绘制X1，X2，X3对Y影响的效应面图，见图1。大豆磷脂及泊洛沙姆188含量越高时，乳剂粒径越小，油相的含量对乳剂粒径的影响最小。综合上述效应面图，根据自变量最优值预测范围，最终确定优选的处方为大豆磷脂用量为1.2%、泊洛沙姆188用量为0.5%、中链油用量为15%。将优选处方代入二项式拟合模型，计算求得指标预测值为230 nm，以此优选配方制备3批静脉乳剂样品，测定其平均粒径为241 nm，模型预测与实测值偏差为4.5%，表明试验得到的拟合方程可较好地描述因素与指标的关系，可用于优化处方及预测其平均粒径。
2.1.3 制备工艺优化 确定注射用中链油(15%)，注射用大豆磷脂(1.2%)，泊洛沙姆188(0.5%)，注射用甘油(3%)。在此基础上考察乳化温度、均质次数、均质压力对乳剂粒径的影响。各因素安排见表3。, 百拇医药(王银艳 李曦 赖秀俊 黎伟 杨雅静 储婷 毛声俊)
[关键词]丹参酮ⅡA；丹酚酸B；制备工艺；星点设计；质量评价
丹参酮ⅡA(tanshione ⅡA)、丹酚酸B(salvianolic acid B)是中药丹参的主要有效单体，2010年版《中国药典》丹参药材的指标成分。丹参酮ⅡA是丹参的脂溶性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、保护血管内皮细胞、抗肿瘤等多种活性作用[1-4]；丹酚酸B是丹参的代表性水溶性成分，具有改善缺血、缺氧所致心肌细胞损伤、抗氧化清除自由基、抗前列腺肿瘤、抗肝纤维化等多方面的心血管药理活性[5-8]。根据文献报道，丹参酮ⅡA和丹酚酸B联用可有效提高抗氧化、损伤心脏微血管内皮细胞的保护作用[9]，诱导骨髓间充质干细胞定向分化为心肌样细胞[10]。然而，丹参酮ⅡA溶解度极低，严重影响了其普通制剂的生物利用度[11]。另一方面，乳剂作为一种水油两相的优良载体，可同时包载脂溶性和水溶性药物，有利于充分发挥丹参的治疗作用。为此，本研究拟探讨以乳剂同时载药丹参脂溶性与水溶性成分的可行性，为从制剂学方面综合利用丹参药效成分提供新思路。
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EF-C5高压均质机(加拿大Avestin)；A-88组织捣碎匀浆机(江苏省金坛市医疗仪器厂)；LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)；TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；Malvern-3000粒径及Zeta电位测定仪(英国)。
丹参酮ⅡA(纯度99.1%，西安天丰生物科技有限公司)；丹参酮ⅡA对照品(中国食品药品检定研究院，批号110766-200716)；丹酚酸B(纯度98.2%，成都曼斯特生物科技有限公司)；丹酚酸B对照品(中国食品药品检定研究院，批号111562-201009)；注射用中链油(铁岭北亚药用油有限公司)；注射用大豆磷脂(上海太伟药业有限公司)；注射用甘油(汕头古汉紫光氨基酸有限公司)；帕洛沙姆188(PluronicF68，德国BASF)；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
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2.1 丹参双相载药乳剂的制备
2.1.1 油相和乳化剂的筛选 在制剂处方中，油相作为溶解丹参酮ⅡA的载体，决定了其载药量。乳剂油相常用注射用大豆油、中链油、油酸乙酯等[12]。据此，称取适量丹参酮ⅡA，置具塞锥形瓶中，分别加入大豆油、中链油、混合油(大豆油-中链油1∶1)，于37 ℃恒温水浴振摇48 h平衡，使丹参酮ⅡA在油相中过饱和。精密称取过滤后的丹参酮ⅡA油溶液0.5 mL至50 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解，定容，过滤，取续滤液，按2.2.2项色谱条件测定各油相中丹参酮ⅡA的溶解度，其在注射用大豆油、中链油、混合油中的溶解度分别为5.97，12.16，9.58 g·L-1。因此，选择中链油作为油相。一般乳化剂在制剂中的主要作用是给予处方足够的乳化能力，因此药物在乳化剂中的溶解度不是筛选乳化剂的关键因素，而安全性和乳化能力才是选择乳化剂的主要因素。根据乳剂经典处方[13]，以阴离子型大豆磷脂为乳化剂，非离子型泊洛沙姆188为助乳化剂。
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2.1.2 星点设计优化处方 在预实验的基础上，初步确定注射用油为中链油， 大豆磷脂为乳化剂，泊洛沙姆188为助乳化剂，制得的乳剂外观均一，离心条件下稳定。在此基础上，主要考察注射用大豆磷脂用量(X1，%)、泊洛沙姆188用量(X2，%)和注射用中链油用量(X3，%)，并设定其用量范围为X1：0.6%～1.8%；X2：0.1%～0.5%；X3：10%～30%。采用3因素星点设计，以平均粒径(Y)为指标，见表1，测定结果见表2。
对实验数据进行二次多项式拟合，模型为Y=b0+b1X1+b2X2+b3X3+b11X12+b22X22+b33X32+b12X1X2+b23X2X3+b13X1X3，以此模型对数据进行拟合，得回归方程为Y=617.545-392.075X1-294.596X2-7.968X3+139.187X12+415.184X22+0.175X32-11.574X1X2+1.401X2X3+0.117X1X3(r=0.969 9)，根据拟合方程，绘制X1，X2，X3对Y影响的效应面图，见图1。大豆磷脂及泊洛沙姆188含量越高时，乳剂粒径越小，油相的含量对乳剂粒径的影响最小。综合上述效应面图，根据自变量最优值预测范围，最终确定优选的处方为大豆磷脂用量为1.2%、泊洛沙姆188用量为0.5%、中链油用量为15%。将优选处方代入二项式拟合模型，计算求得指标预测值为230 nm，以此优选配方制备3批静脉乳剂样品，测定其平均粒径为241 nm，模型预测与实测值偏差为4.5%，表明试验得到的拟合方程可较好地描述因素与指标的关系，可用于优化处方及预测其平均粒径。
2.1.3 制备工艺优化 确定注射用中链油(15%)，注射用大豆磷脂(1.2%)，泊洛沙姆188(0.5%)，注射用甘油(3%)。在此基础上考察乳化温度、均质次数、均质压力对乳剂粒径的影响。各因素安排见表3。, 百拇医药(王银艳 李曦 赖秀俊 黎伟 杨雅静 储婷 毛声俊)