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编号:12639211
基于ITS序列鉴别石斛类药材(2)
http://www.100md.com 2014年10月15日 中国中药杂志 2014年第20期
     提取获得的DNA沉淀溶解于50~200 μL的TE溶液中,紫外分光光度法与琼脂糖凝胶电泳检测样品DNA浓度与质量。

    2.2 ITS区片段的PCR扩增与产物纯化 根据文献报道的关于石斛属植物rDNA ITS扩增引物序列[6],上游引物5′-CGTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAAC-3′与下游引物 5′-TTATTGATATGCTTAAACTCAGCGGG-3′对药材进行ITS区全序列扩增。采用标准双链PCR反应扩增整个ITS片段(5′18S~3′26S,包括5.8S编码区)。30 μL反应体积含10×PCR buffer 3 μL,MgCl2 (25 mmol·L-1)1.5 μL,dNTP mix (2 mmol·L-1) 2.5 μL,上游与下游引物各1 μL(10 pmol·L-1),Taq DNA polymerase (5 U·μL-1) 0.2 μL,1 μL模板溶液 (DNA 30~80 ng) ......
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