4 讨论

    品种混乱现象是目前石斛类药材在实际应用时难以克服的问题。石斛属种类丰富，鉴别难度大，需要有丰富实践经验，干燥加工成药材以后难度更大。另外，石斛属化学成分研究积累不够全面，目前所建立的一些分析方法也不能解决所有的药材鉴别问题。

    近年来DNA序列标记如核糖体rDNA ITS^[6-15]、叶绿体psbA-trnH^[16]与matK^[17]序列已被用于石斛属植物的鉴别研究，其中ITS序列在石斛种间具有较高的分辨率，成为石斛类DNA鉴别最为有效的序列标记。ITS序列在高等植物中拷贝数高，序列片段短，容易通过PCR技术从痕量DNA中扩增出来，因此非常适合于基因组DNA已有降解的干燥药材研究。但是，目前ITS序列用于石斛类的研究主要集中于新鲜、冰冻材料或硅胶快速干燥样品，有关药材干品的鉴别还鲜有报道。

    石斛药材的干燥、加工、贮藏等过程均造成了DNA不同程度的降解，从干药材获得高质量DNA是分子鉴别的关键所在。为此，本研究首先选用石斛类中常用的QIAGEN试剂盒、改良CTAB法(微量提取)对药材基因组DNA进行提取 ......