细辛脑亚微乳注射液的质量评价及稳定性考察(1)
[摘要]该文采用HPLC 测定细辛脑亚微乳注射液的含量，并以pH、粒径、过氧化值、甲氧基苯胺值、游离脂肪酸、溶血磷脂酰胆碱、可见异物、不溶性微粒、无菌、细菌内毒素和有关物质等为指标，建立细辛脑亚微乳注射液的质量评价方法，并对其稳定性进行考察。结果表明：细辛脑亚微乳注射液物理外观均匀，呈乳白色；3批制剂质量分数分别为标示量的102.9%，100.8%，97.70%；粒径为210～250 nm，其他各项指标均符合静脉注射乳质量要求。加速与长期试验条件下留样12个月，各项检测指标均无显著变化，稳定性良好。该文建立的质量评价方法可用于细辛脑亚微乳注射液的质量控制与稳定性考察，为其进一步的临床研究奠定了基础。
[关键词]α-细辛脑；亚微乳；质量评价；稳定性
细辛脑(asarone)，又名α-细辛脑，α-细辛醚。是天南星科菖蒲属植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott的主要有效成分，中药石菖蒲性辛、温，味苦，祖国医学认为它能开窍豁痰、醒神益智、镇静解痉[1]。研究发现α-细辛脑具有很好的止咳、平喘、祛痰、镇静、解痉以及抗惊厥的作用，在临床上应用于哮喘、肺炎、COPD及癫痫发作，疗效确切[2]。然而，α-细辛脑水溶性差[3]，市售细辛脑注射液处方中需加入丙二醇和/或聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)进行助溶和增溶，常导致注射疼痛、过敏等不良反应[4]。因此，本课题组将其制备成亚微乳注射液，不仅可提高药物的溶解度与稳定性，而且可显著减少原剂型的不良反应[5-6]。本文在前期研究基础上[7-11]，尝试建立了细辛脑亚微乳注射液的质量评价方法，以期为其进一步的临床研究奠定基础。
, 百拇医药
1 材料
Agilent 1100 series高效液相色谱仪(包括G1315D 1260DAD VL，G1311A QuatPump，G1316A COLCOM)，LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)，蒸发光散射检测器(Softa Model 100 ELSD)，PHS-3C 精密 pH 计(上海雷磁仪器厂)，Malvern Zetasizer Nano ZS90纳米粒径电位分析仪(英国马尔文仪器有限公司)，YB-2型澄明度检测仪(天津大学精密仪器厂)，DNP-9052电热恒温培养箱(上海精密实验设备有限公司)。
细辛脑亚微乳注射液规格为2 mL：8 mg，自制，批号为20130411，20130412，20130413；α-细辛脑对照品(哈尔滨三联药业有限公司，批号121001，纯度99%)，β-细辛脑对照品(SIGMA，纯度70%，批号S38558-468)，溶血磷脂酰胆碱对照品(SIGMA，纯度99%)，其他试剂和试药(色谱纯或分析纯，市售)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 细辛脑亚微乳注射液的制备
精密称取豆磷脂12.0 g和泊洛沙姆188(F-68) 3.0 g，加80 ℃的注射用水适量，搅拌分散，转移至用80 ℃水浴保温的高速搅拌器内，再加甘油22.0 g 与注射用水适量，搅拌作为水相；另精密称取4.0 g α-细辛脑，溶解于100.0 g 80 ℃的大豆油中作为油相。在高速搅拌条件下，将油相缓慢加入80 ℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为1 000 mL，将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力，待压力稳定后，收集高压乳匀后的乳液，调节pH至7～8，经微孔滤膜(2 μm)过滤，在通氮气的条件下，将乳剂分装于洁净安瓿中，熔封，置于旋转式热压灭菌器内，缓慢升温至121 ℃，灭菌15 min，即得。
2.2 细辛脑亚微乳注射液的质量评价
, http://www.100md.com
2.2.1 外观性状
20130411批、20130412批、20130413批样品均为白色乳状液体。
2.2.2 pH
依法[8]测定其pH，20130411批、20130412批、20130413批样品pH分别为5.79，6.03，6.11，均在5.0～7.5，符合亚微乳注射液的相关规定。
2.2.3 粒径
取本品1支，精密吸取0.1 mL，用精滤后的纯化水稀释至50 mL，混匀，作为供试液。采用Malvern Zetasizer Nano ZS90纳米粒径电位分析仪，采用动态激光散射粒径测定法测定，20130411批、20130412批、20130413批样品的平均粒径分别为(219.5±3.6)，(239.2±3.4)，(238.9 ±3.8) nm，PDI值分别为0.129，0.064，0.078，所得制剂粒径较小、分布均匀、分布范围较窄。符合《中国药典》关于静脉注射乳液的乳粒不大于0.5 μm规定。
, 百拇医药
2.2.4 过氧化值
精密量取本品5 mL，依法[8]检查(《中国药典》2010年版二部附录Ⅶ H)，20130411批、20130412批、20130413批样品过氧化值结果分别为0.05，0.04，0.03 mL，均符合供试品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01 mol·L-1)的毫升数不大于0.2 mL的规定。
2.2.5 甲氧基苯胺值
精密量取样品10 mL，按《脂肪乳注射液(C14-C24) 质量标准》中收载方法进行测定，20130411批、20130412批、20130413批样品甲氧基苯胺值为1.58，1.67，1.63，符合其值不得超过2.2的规定。
2.2.6 游离脂肪酸
取油酸，精密称定，加正庚烷稀释成0.015 mol·L-1的对照品溶液，摇匀即得对照品溶液。精密量取本品与对照品溶液各5 mL，分别置100 mL具塞试管中，加异丙醇-正庚烷(4∶1)25.0 mL，振摇1 min，加尼罗蓝指示液8 mL，在通氮气条件下，用氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)滴定至溶液显淡粉色。记录供试品溶液与对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)的毫升数。在本测定方法条件下，精密度RSD 1.1%，平均回收率为103.3%，RSD 1.5%。20130411批、20130412批、20130413批样品消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)的结果分别为0.70，0.85，0.58 mL，均小于对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)7.50 mL，符合本品拟定标准的规定。, 百拇医药(黎红佳 赖秀俊 黎伟 储婷 金辉 毛声俊)
[关键词]α-细辛脑；亚微乳；质量评价；稳定性
细辛脑(asarone)，又名α-细辛脑，α-细辛醚。是天南星科菖蒲属植物石菖蒲Acorus tatarinowii Schott的主要有效成分，中药石菖蒲性辛、温，味苦，祖国医学认为它能开窍豁痰、醒神益智、镇静解痉[1]。研究发现α-细辛脑具有很好的止咳、平喘、祛痰、镇静、解痉以及抗惊厥的作用，在临床上应用于哮喘、肺炎、COPD及癫痫发作，疗效确切[2]。然而，α-细辛脑水溶性差[3]，市售细辛脑注射液处方中需加入丙二醇和/或聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(吐温-80)进行助溶和增溶，常导致注射疼痛、过敏等不良反应[4]。因此，本课题组将其制备成亚微乳注射液，不仅可提高药物的溶解度与稳定性，而且可显著减少原剂型的不良反应[5-6]。本文在前期研究基础上[7-11]，尝试建立了细辛脑亚微乳注射液的质量评价方法，以期为其进一步的临床研究奠定基础。
, 百拇医药
1 材料
Agilent 1100 series高效液相色谱仪(包括G1315D 1260DAD VL，G1311A QuatPump，G1316A COLCOM)，LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津)，蒸发光散射检测器(Softa Model 100 ELSD)，PHS-3C 精密 pH 计(上海雷磁仪器厂)，Malvern Zetasizer Nano ZS90纳米粒径电位分析仪(英国马尔文仪器有限公司)，YB-2型澄明度检测仪(天津大学精密仪器厂)，DNP-9052电热恒温培养箱(上海精密实验设备有限公司)。
细辛脑亚微乳注射液规格为2 mL：8 mg，自制，批号为20130411，20130412，20130413；α-细辛脑对照品(哈尔滨三联药业有限公司，批号121001，纯度99%)，β-细辛脑对照品(SIGMA，纯度70%，批号S38558-468)，溶血磷脂酰胆碱对照品(SIGMA，纯度99%)，其他试剂和试药(色谱纯或分析纯，市售)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 细辛脑亚微乳注射液的制备
精密称取豆磷脂12.0 g和泊洛沙姆188(F-68) 3.0 g，加80 ℃的注射用水适量，搅拌分散，转移至用80 ℃水浴保温的高速搅拌器内，再加甘油22.0 g 与注射用水适量，搅拌作为水相；另精密称取4.0 g α-细辛脑，溶解于100.0 g 80 ℃的大豆油中作为油相。在高速搅拌条件下，将油相缓慢加入80 ℃水浴保温的水相中，加完后继续搅拌，即得均匀的初乳，并用注射用水调节体积为1 000 mL，将初乳迅速转移至高压乳匀机中，调节乳匀压力，待压力稳定后，收集高压乳匀后的乳液，调节pH至7～8，经微孔滤膜(2 μm)过滤，在通氮气的条件下，将乳剂分装于洁净安瓿中，熔封，置于旋转式热压灭菌器内，缓慢升温至121 ℃，灭菌15 min，即得。
2.2 细辛脑亚微乳注射液的质量评价
, http://www.100md.com
2.2.1 外观性状
20130411批、20130412批、20130413批样品均为白色乳状液体。
2.2.2 pH
依法[8]测定其pH，20130411批、20130412批、20130413批样品pH分别为5.79，6.03，6.11，均在5.0～7.5，符合亚微乳注射液的相关规定。
2.2.3 粒径
取本品1支，精密吸取0.1 mL，用精滤后的纯化水稀释至50 mL，混匀，作为供试液。采用Malvern Zetasizer Nano ZS90纳米粒径电位分析仪，采用动态激光散射粒径测定法测定，20130411批、20130412批、20130413批样品的平均粒径分别为(219.5±3.6)，(239.2±3.4)，(238.9 ±3.8) nm，PDI值分别为0.129，0.064，0.078，所得制剂粒径较小、分布均匀、分布范围较窄。符合《中国药典》关于静脉注射乳液的乳粒不大于0.5 μm规定。
, 百拇医药
2.2.4 过氧化值
精密量取本品5 mL，依法[8]检查(《中国药典》2010年版二部附录Ⅶ H)，20130411批、20130412批、20130413批样品过氧化值结果分别为0.05，0.04，0.03 mL，均符合供试品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.01 mol·L-1)的毫升数不大于0.2 mL的规定。
2.2.5 甲氧基苯胺值
精密量取样品10 mL，按《脂肪乳注射液(C14-C24) 质量标准》中收载方法进行测定，20130411批、20130412批、20130413批样品甲氧基苯胺值为1.58，1.67，1.63，符合其值不得超过2.2的规定。
2.2.6 游离脂肪酸
取油酸，精密称定，加正庚烷稀释成0.015 mol·L-1的对照品溶液，摇匀即得对照品溶液。精密量取本品与对照品溶液各5 mL，分别置100 mL具塞试管中，加异丙醇-正庚烷(4∶1)25.0 mL，振摇1 min，加尼罗蓝指示液8 mL，在通氮气条件下，用氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)滴定至溶液显淡粉色。记录供试品溶液与对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)的毫升数。在本测定方法条件下，精密度RSD 1.1%，平均回收率为103.3%，RSD 1.5%。20130411批、20130412批、20130413批样品消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)的结果分别为0.70，0.85，0.58 mL，均小于对照品溶液消耗氢氧化钠滴定液(0.01 mol·L-1)7.50 mL，符合本品拟定标准的规定。, 百拇医药(黎红佳 赖秀俊 黎伟 储婷 金辉 毛声俊)