不同炮制方法对加拿大产西洋参中10种人参皂苷的影响(1)
[摘要]探讨不同炮制方法对加拿大产西洋参中10种人参皂苷的影响。采用课题组前期已建立的测定西洋参人参皂苷的HPLC-PDA-ESI-MS方法，测定自制西洋白参(新鲜全参切片+-80 ℃冷冻干燥)、自制西洋红参(新鲜全参+隔水蒸煮+切片+-80 ℃冷冻干燥)和购于加拿大西安大略省大山行农场的商品西洋参(新鲜全参+电热鼓风烘干)中10种人参皂苷在炮制前后的变化情况。人参总皂苷含量为：商品西洋参>自制西洋白参>自制西洋红参；与自制西洋白参相比，自制西洋红参人参皂苷Re，Rc，Rb2，Rb3的含量降低，人参皂苷Rg1，Rb1的含量升高；人参皂苷Rg2，Rg3在六年生自制西洋白参、商品西洋参中采用PDA检测器均未检测到，采用ESI-MS能检测到较低响应值的Rg2，Rg3，但是在六年生自制西洋红参中其质量分数分别达到了0.027%，0.040 1%；通过二级质谱分析发现新鲜加拿大西洋参炮制成西洋红参后，人参皂苷RA0的量增加；人参皂苷Rf在所有西洋参样品中均未检测到。炮制后加拿大产西洋红参中人参皂苷的含量发生了较大变化，部分原本含量很低的人参皂苷含量增加，部分人参皂苷含量降低；与文献报道一致，西洋参样品中不含人参皂苷Rf。
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[关键词]加拿大；西洋参；炮制，HPLC-PDA-ESI-MS；人参皂苷
西洋参Panacis Quinquefolii Radix为五加科人参属植物西洋参Panax quinquefolius L.的根，又名花旗参，根性凉，能补气养阴、清热生津[1-2]。目前在北美西洋参野生药材已濒临灭绝，市场销售的药材完全依靠规模化农业种植，是北美非常有名和高销量的十大药材之一；在加拿大和美国，已经越来越多的学者开始关注西洋参的保健功效，但是国外学者较少采用中医药的炮制理论去研究西洋参。对西洋参进行了与人参红参类似的炮制研究，发现西洋红参的抗癌活性高于西洋白参[3-5]。冷冻干燥法是在低温的条件排除95%～99%以上的水分，使干燥后产品能长期保存而不致变质，特别适用于热敏性、易氧化和易挥发性物质，适合一些化学产品、药品和食品干燥，广泛地应用于医药工业和食品工业，也被认为是目前保存植物的生物活性成分最全面的干燥方法[6]。但是，目前在加拿大西安大略省或美国威斯康辛州农场的商品西洋参(根)仍然为电热鼓风干燥法，没有了解到加拿大或者美国的西洋参农场采用冷冻干燥法干燥商品西洋参(根)。因此，本课题拟采用HPLC-PDA-ESI-MS方法，以加拿大西安大略省大山行农场的西洋参为研究对象，自制-80 ℃冷冻干燥西洋白参、自制-80 ℃冷冻干燥西洋红参，与加拿大西安大略省大山行农场的电热鼓风烘干的商品西洋参进行比较，探讨3种炮制方法对于样品中的10种人参皂苷的影响。
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1 材料
Thermo Finnegan高效液相色谱仪配PDA检测器，联接Thermo Finnegan LCQ Advantage 质谱仪(美国Thermo公司)；Milli-Q超纯水机(美国Millipore公司)；HH-2型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；RECEO ULT21869D39型超低温冰箱；Labconco 75050型冷冻干燥机(美国Labconco公司)；METTLER AE240型电子天平[梅特勒-托利多(上海)有限公司]。人参皂苷对照品Re，Rg1，Rb1，Rf，Rc，Rb2，Rb3，Rg2，Rd，Rg3购于四川省维克奇生物科技有限公司(中国)。HPLC级乙腈(美国Fisher公司)，分析纯正丁醇和甲醇(四川成都科龙化学试剂公司)。
试验所用的西洋参药材样品(包括自制的西洋白参、西洋红参和商品西洋参)均采自于加拿大的大山行农场；用于炮制工艺的五年生和六年生西洋参于2009年8月23日和2010年8月23日采集；商品西洋参为2009年8月23日采收的同一批五年生西洋参；因该农场西洋参加工工艺保密，作者无法获得具体加工工艺参数，无法自己加工，故委托该农场按照商品西洋参标准加工工艺进行加工，同年9月再从农场购买，经西南民族大学民族医药研究院刘圆教授鉴定为五加科人参属植物西洋参P. quinquefolius L.的干燥根。
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2 方法
2.1 色谱与质谱条件
DIKMA diamonsil色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速300 μL·min-1，柱温35 ℃，检测波长203 nm，进样体积20 μL；流动相：定量分析时(流动相不经过质谱系统)为A(乙腈) 和B(0.05%磷酸水溶液)，定性分析时为A(乙腈)和C(0.05% 冰醋酸水溶液)；梯度洗脱程序为0～5 min，20%～26% A；5～10 min，26%～34% A；10～25 min，34%～35% A；25～35 min，35%～40% A；35～45 min，40%～45% A；45～50 min，45%～50% A；50～60 min，50%～60% A；60～65 min，60%～70% A；65～75 min，70%～80% A。质谱条件：ESI离子源，正离子检测模式，鞘气10 L·min-1，辅助气10 L·min-1，喷雾电压4.5 kV，毛细管温度320 ℃，毛细管电压30 V。HPLC色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
取人参皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇定容至5 mL量瓶中，制成Re，Rg1，Rb1，Rf，Rc，Rb2，Rb3，Rg2，Rd，Rg3质量浓度分别为0.584，0.136，1.06，1.06，0.282，0.470，0.980，0.470，0.480，0.019 6 g·L-1的对照品储备液。, 百拇医药
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[关键词]加拿大；西洋参；炮制，HPLC-PDA-ESI-MS；人参皂苷
西洋参Panacis Quinquefolii Radix为五加科人参属植物西洋参Panax quinquefolius L.的根，又名花旗参，根性凉，能补气养阴、清热生津[1-2]。目前在北美西洋参野生药材已濒临灭绝，市场销售的药材完全依靠规模化农业种植，是北美非常有名和高销量的十大药材之一；在加拿大和美国，已经越来越多的学者开始关注西洋参的保健功效，但是国外学者较少采用中医药的炮制理论去研究西洋参。对西洋参进行了与人参红参类似的炮制研究，发现西洋红参的抗癌活性高于西洋白参[3-5]。冷冻干燥法是在低温的条件排除95%～99%以上的水分，使干燥后产品能长期保存而不致变质，特别适用于热敏性、易氧化和易挥发性物质，适合一些化学产品、药品和食品干燥，广泛地应用于医药工业和食品工业，也被认为是目前保存植物的生物活性成分最全面的干燥方法[6]。但是，目前在加拿大西安大略省或美国威斯康辛州农场的商品西洋参(根)仍然为电热鼓风干燥法，没有了解到加拿大或者美国的西洋参农场采用冷冻干燥法干燥商品西洋参(根)。因此，本课题拟采用HPLC-PDA-ESI-MS方法，以加拿大西安大略省大山行农场的西洋参为研究对象，自制-80 ℃冷冻干燥西洋白参、自制-80 ℃冷冻干燥西洋红参，与加拿大西安大略省大山行农场的电热鼓风烘干的商品西洋参进行比较，探讨3种炮制方法对于样品中的10种人参皂苷的影响。
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1 材料
Thermo Finnegan高效液相色谱仪配PDA检测器，联接Thermo Finnegan LCQ Advantage 质谱仪(美国Thermo公司)；Milli-Q超纯水机(美国Millipore公司)；HH-2型数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；RECEO ULT21869D39型超低温冰箱；Labconco 75050型冷冻干燥机(美国Labconco公司)；METTLER AE240型电子天平[梅特勒-托利多(上海)有限公司]。人参皂苷对照品Re，Rg1，Rb1，Rf，Rc，Rb2，Rb3，Rg2，Rd，Rg3购于四川省维克奇生物科技有限公司(中国)。HPLC级乙腈(美国Fisher公司)，分析纯正丁醇和甲醇(四川成都科龙化学试剂公司)。
试验所用的西洋参药材样品(包括自制的西洋白参、西洋红参和商品西洋参)均采自于加拿大的大山行农场；用于炮制工艺的五年生和六年生西洋参于2009年8月23日和2010年8月23日采集；商品西洋参为2009年8月23日采收的同一批五年生西洋参；因该农场西洋参加工工艺保密，作者无法获得具体加工工艺参数，无法自己加工，故委托该农场按照商品西洋参标准加工工艺进行加工，同年9月再从农场购买，经西南民族大学民族医药研究院刘圆教授鉴定为五加科人参属植物西洋参P. quinquefolius L.的干燥根。
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2 方法
2.1 色谱与质谱条件
DIKMA diamonsil色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速300 μL·min-1，柱温35 ℃，检测波长203 nm，进样体积20 μL；流动相：定量分析时(流动相不经过质谱系统)为A(乙腈) 和B(0.05%磷酸水溶液)，定性分析时为A(乙腈)和C(0.05% 冰醋酸水溶液)；梯度洗脱程序为0～5 min，20%～26% A；5～10 min，26%～34% A；10～25 min，34%～35% A；25～35 min，35%～40% A；35～45 min，40%～45% A；45～50 min，45%～50% A；50～60 min，50%～60% A；60～65 min，60%～70% A；65～75 min，70%～80% A。质谱条件：ESI离子源，正离子检测模式，鞘气10 L·min-1，辅助气10 L·min-1，喷雾电压4.5 kV，毛细管温度320 ℃，毛细管电压30 V。HPLC色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
取人参皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇定容至5 mL量瓶中，制成Re，Rg1，Rb1，Rf，Rc，Rb2，Rb3，Rg2，Rd，Rg3质量浓度分别为0.584，0.136，1.06，1.06，0.282，0.470，0.980，0.470，0.480，0.019 6 g·L-1的对照品储备液。, 百拇医药