苁蓉总苷胶囊HPLC指纹图谱研究(1)
[摘要]该文建立苁蓉总苷胶囊的 HPLC指纹图谱，为其质量评价提供依据。以毛蕊花糖苷为参照物，采用高效液相色谱法，对苁蓉总苷胶囊进行了指纹图谱分析。色谱条件：Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1；检测波长330 nm；柱温30 ℃。该方法精密度高、重复性好，所测样品中的13个成分均达到基线分离，并且15批成品指纹图谱相似度在0.95以上。该方法准确、可行，是一种简便、有效的中药质量评价手段。
[关键词]苁蓉总苷胶囊；高效液相色谱法；指纹图谱；松果菊苷
中药指纹图谱是中药基础研究以及新药研发的一种研究体系，在中药制剂评价和中药生产的质量控制有广泛应用[1-2]。肉苁蓉为我国二级保护物种，收载于《国际野生植物保护目录》[3]，药用价值极高，素有“沙漠人参”[4]的美誉，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效[5]，肉苁蓉主要含苯乙醇苷类、环烯醚萜、多糖等成分[6]，其中苯乙醇苷类成分为肉苁蓉补肾益精的主要成分[7-8]，具抗氧化、神经保护、改善学习记忆、免疫调节等作用[9]。苁蓉总苷胶囊具有补肾益髓、健脑益智的功效，用于髓海不足证的轻中度血管性痴呆[10]，主要成分为苯乙醇苷类化合物，为了更好地进行质量控制，本文采用HPLC建立了苁蓉总苷胶囊指纹图谱，以更为有效快捷的控制苁蓉总苷胶囊的内在质量，为苁蓉总苷胶囊质量评价提供依据，为进一步研究打下了基础。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 高效液相色谱仪(Ultimate 3000)；XP6电子天平(METTLER TOLEDO)；色谱柱Wtaters C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；离心机(Centrifuge 5415D)；苁蓉总苷胶囊(江苏康缘药业股份有限公司制备，批号120501，120502，12503，120801，120802，120803，121001，121002，121003，130701，130702，130703，131001，131002，131003)；松果菊苷，毛蕊花糖苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为111670-200503，111530-200706)；异毛蕊花糖苷对照品(批号MUST-12081001，成都曼斯特生物科技有限公司)；甲醇(色谱纯)，水(超纯水)，其余试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件 Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B)，洗脱程序为：0～15 min，18%～28% A；15～30 min，28%～32% A；30～40 min，32% A；40～50 min，32%～50% A。柱温30 ℃；流速1 mL·min-1；检测波长330 nm；进样量5 μL。在上述色谱条件下进样分析，样品中各待测组分与相邻峰的分离度均大于1.5，塔板数按松果菊苷计算大于3 000。
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1.3 对照品溶液的制备 取松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成每1 mL含松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷为0.100，0.003，0.030 mg的溶液，即得。
1.4 供试品溶液的制备 取苁蓉总苷胶囊内容物适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成每1 mL含样品0.2 mg样品的溶液，即得。
1.5 测定方法 取上述溶液各5 μL，分别进样，测定，以毛蕊花糖苷特征峰为参照峰，计算共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积。
2 结果与分析
2.1 指纹图谱方法学考察 比较各批号苁蓉总苷胶囊样品的指纹图谱，选择13个成分作为共有色谱峰，各峰分离度良好，分离度在规定范围内，见图1。
参照物试验：分别精密吸取上述对照品溶液，进样，其中主峰的保留时间用于确定苁蓉总苷胶囊中毛蕊花糖苷的峰位。
, 百拇医药
精密度试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，连续进样6次进行测定。以第1次进样所得指纹图谱做为对照，计算相似度，结果相似度结果均不小于0.95，均符合指纹图谱的技术要求，表明该方法精密度良好。
稳定性试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，于0，1，2，4，8，12，24 h分别测定一次指纹图谱，共测7次，以0 h进样所得指纹图谱为对照计算相似度，相似度结果均不小于0.98，表明供试品溶液24 h内成分是稳定的，符合指纹图谱的技术要求(应不小于0.95)。
重复性试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，同法制备供试品溶液6份，依法测定，结果计算相似度，相似度结果均不小于0.98，符合指纹图谱的技术要求(不小于0.95)。
根据以上方法学考察结果，表明该方法测定苁蓉总苷胶囊指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好，能够准确测定该制剂的指纹图谱。
2.2 指纹图谱的建立 分别取15批不同批号的苁蓉总苷胶囊，按供试品的制备方法制备，分别测定。将15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版本2004A)，对保留时间的色谱峰进行多点校正后，自动匹配，生成对照指纹图谱，见图2，共标定14个共有峰，占总面积的90%以上，由于松果菊苷峰面积超过50%，故在计算相似度时去掉该峰，其余13个峰选毛蕊花糖苷为参照峰(S) ，各指纹峰的相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于2.1%，各批苁蓉总苷胶囊样品与对照指纹图谱比较相似度在 0.950～1.00，说明工艺稳定，见表1。, 百拇医药(杨素德 王伟 李家春 萧伟)
[关键词]苁蓉总苷胶囊；高效液相色谱法；指纹图谱；松果菊苷
中药指纹图谱是中药基础研究以及新药研发的一种研究体系，在中药制剂评价和中药生产的质量控制有广泛应用[1-2]。肉苁蓉为我国二级保护物种，收载于《国际野生植物保护目录》[3]，药用价值极高，素有“沙漠人参”[4]的美誉，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效[5]，肉苁蓉主要含苯乙醇苷类、环烯醚萜、多糖等成分[6]，其中苯乙醇苷类成分为肉苁蓉补肾益精的主要成分[7-8]，具抗氧化、神经保护、改善学习记忆、免疫调节等作用[9]。苁蓉总苷胶囊具有补肾益髓、健脑益智的功效，用于髓海不足证的轻中度血管性痴呆[10]，主要成分为苯乙醇苷类化合物，为了更好地进行质量控制，本文采用HPLC建立了苁蓉总苷胶囊指纹图谱，以更为有效快捷的控制苁蓉总苷胶囊的内在质量，为苁蓉总苷胶囊质量评价提供依据，为进一步研究打下了基础。
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1 材料与方法
1.1 材料 高效液相色谱仪(Ultimate 3000)；XP6电子天平(METTLER TOLEDO)；色谱柱Wtaters C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；离心机(Centrifuge 5415D)；苁蓉总苷胶囊(江苏康缘药业股份有限公司制备，批号120501，120502，12503，120801，120802，120803，121001，121002，121003，130701，130702，130703，131001，131002，131003)；松果菊苷，毛蕊花糖苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为111670-200503，111530-200706)；异毛蕊花糖苷对照品(批号MUST-12081001，成都曼斯特生物科技有限公司)；甲醇(色谱纯)，水(超纯水)，其余试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件 Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流动相甲醇(A)-0.1%甲酸溶液(B)，洗脱程序为：0～15 min，18%～28% A；15～30 min，28%～32% A；30～40 min，32% A；40～50 min，32%～50% A。柱温30 ℃；流速1 mL·min-1；检测波长330 nm；进样量5 μL。在上述色谱条件下进样分析，样品中各待测组分与相邻峰的分离度均大于1.5，塔板数按松果菊苷计算大于3 000。
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1.3 对照品溶液的制备 取松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成每1 mL含松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷为0.100，0.003，0.030 mg的溶液，即得。
1.4 供试品溶液的制备 取苁蓉总苷胶囊内容物适量，精密称定，加50%甲醇溶解，制成每1 mL含样品0.2 mg样品的溶液，即得。
1.5 测定方法 取上述溶液各5 μL，分别进样，测定，以毛蕊花糖苷特征峰为参照峰，计算共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积。
2 结果与分析
2.1 指纹图谱方法学考察 比较各批号苁蓉总苷胶囊样品的指纹图谱，选择13个成分作为共有色谱峰，各峰分离度良好，分离度在规定范围内，见图1。
参照物试验：分别精密吸取上述对照品溶液，进样，其中主峰的保留时间用于确定苁蓉总苷胶囊中毛蕊花糖苷的峰位。
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精密度试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，连续进样6次进行测定。以第1次进样所得指纹图谱做为对照，计算相似度，结果相似度结果均不小于0.95，均符合指纹图谱的技术要求，表明该方法精密度良好。
稳定性试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，于0，1，2，4，8，12，24 h分别测定一次指纹图谱，共测7次，以0 h进样所得指纹图谱为对照计算相似度，相似度结果均不小于0.98，表明供试品溶液24 h内成分是稳定的，符合指纹图谱的技术要求(应不小于0.95)。
重复性试验：取批号为131001的苁蓉总苷胶囊，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，同法制备供试品溶液6份，依法测定，结果计算相似度，相似度结果均不小于0.98，符合指纹图谱的技术要求(不小于0.95)。
根据以上方法学考察结果，表明该方法测定苁蓉总苷胶囊指纹图谱精密度、重复性、稳定性均较好，能够准确测定该制剂的指纹图谱。
2.2 指纹图谱的建立 分别取15批不同批号的苁蓉总苷胶囊，按供试品的制备方法制备，分别测定。将15批苁蓉总苷胶囊指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(版本2004A)，对保留时间的色谱峰进行多点校正后，自动匹配，生成对照指纹图谱，见图2，共标定14个共有峰，占总面积的90%以上，由于松果菊苷峰面积超过50%，故在计算相似度时去掉该峰，其余13个峰选毛蕊花糖苷为参照峰(S) ，各指纹峰的相对保留时间、相对峰面积的RSD均小于2.1%，各批苁蓉总苷胶囊样品与对照指纹图谱比较相似度在 0.950～1.00，说明工艺稳定，见表1。, 百拇医药(杨素德 王伟 李家春 萧伟)