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编号:12639291
构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素(2)
http://www.100md.com 2014年10月15日 中国中药杂志 2014年第20期
     1.2 方法

    1.2.1 番茄红素功能基因克隆 于LB液体培养基中,37 ℃振荡培养成团泛菌P. agglomerans,1万 g离心收集菌体,用DNA提取试剂盒提取基因组模板,分别用引物组合SexA-CrtB/Asc1-CrtB和SexA-CrtI/Asc1-CrtB/I PCR扩增获得CrtB和CrtI基因。

    1.2.2 质粒构建 SexAⅠ和AscⅠ分别双酶切质粒pHUra-δ DNA-tHMG1-T和pHUra-δDNA-tHMG1-P,及方法1.2.1中获得的CrtB和CrtI基因片段,割胶回收目的片段,分别用快连酶连接(pHUra-δDNA-tHMG1-T片段与CrtI片段相连,pHUra-δDNA-tHMG1-P与CrtB片段相连),转化大肠杆菌Trans10感受态细胞,在含有100 mg·L-1氨苄青霉素LB培养基上过夜培养 ......
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