构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素(3)
1.2.5 番茄红素检测 菌体内番茄红素含量的检测:取2 mL发酵液于12 000 g离心3 min,无菌水清洗后,加适量玻璃珠(0.5 mm)和1 mL提取液(甲醇-乙腈-二氯甲烷 21∶21∶8),振荡破碎5 min,冰水中超声30 min,10 000 r·min-1离心5 min,取上清液(提取二次,合并上清液);上清液过0.22 μm有机膜后用高效液相色谱分析番茄红素产量。HPLC检测方法:DAD 检测器,Waters Symmetry C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-乙腈-二氯甲烷21∶21∶8,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长450 nm;每个待测样品进行3个生物学重复;番茄红素标准品用于定量分析。
萃取相的检测方法:高密度发酵过程中,从加入萃取剂时刻起,每24 h取20 mL样品,12 000 r·min-1离心 ......
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