葎草药材的质量标准研究(1)
[摘要]为建立葎草药材的质量标准，参照《中国药典》2010年版附录相关方法，对葎草药材的水分、灰分进行测定；以木犀草苷和大波斯菊苷为指标成分，采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法进行含量测定。结果表明葎草的显微鉴别特征性强；薄层色谱斑点清晰，分离度好；葎草中含木犀草苷质量分数为0.015% ～ 0.651%(平均值0.148%)，含大波斯菊苷质量分数为0.003% ～ 0.118%(平均值0.036%)。所建立的方法操作简便，准确可靠，重复性好，可用于葎草药材的质量控制。
[关键词]葎草药材；质量标准；显微鉴别；薄层鉴别；含量测定
葎草别名拉拉秧、锯子草、五爪龙等，始载于《唐本草》，为桑科植物葎草Humulus scandens.(Lour.)Merr.的干燥地上部分，具有清热解毒、利尿通淋之功效，用于肺热咳嗽、肺痈、虚热烦渴、热淋、水肿、小便不利、湿热泻痢、热毒疮疡等症[1-3]。葎草全草中含黄酮类、萜类、生物碱、挥发油、酸性物质等多种化学成分[4-6]，其中黄酮类化合物是从葎草全草中分离出的含量较高的成分[7]，且现代药理研究表明葎草中的黄酮类物质是其利水消肿、保护血管等药理作用的主要物质基础[8-9]。葎草为尿感宁颗粒等成方制剂的重要组成药味，是《中国药典》2010年版一部附录收录品种，只规定其基源，无鉴别项、检查项和对指标成分定性、定量检测，难以控制药材及其制剂的质量和保证临床用药的安全性和有效性。
, 百拇医药
本研究首次建立葎草药材的质量控制方法和标准，包括性状描述、显微鉴别，水分、灰分测定，以木犀草苷和大波斯菊苷为指标成分的薄层色谱鉴别及高效液相色谱含量测定方法，为葎草药材及其制剂的质量控制提供科学依据。
1 材料
Agilent1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器、工作站)；Linomat-Ⅵ薄层色谱自动点样器(瑞士CAMAG公司)；Reprostar 3薄层色谱摄像仪(瑞士CAMAG公司)；sartoriusBSA124S-CW电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；sartoriusBT 25 S电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)；SX2型箱式电炉(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)。
乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。HSG薄层色谱硅胶预制板(批号110601，烟台市化学工业研究所)。木犀草苷、大波斯菊苷对照品(上海中药标准化研究中心，纯度>98%)；16批葎草药材均为市售品和产地收集，由上海中药标准化研究中心吴立宏博士鉴定为桑科植物葎草H. scandens的干燥地上部分，详见表1。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 性状
本品为缠绕草本，茎、枝、叶柄均具倒钩刺。茎藤六角柱形，不易折断；叶为近肾状五角形掌状，5～7深裂，稀为3裂，基部心脏形，表面粗糙，具毛茸，裂片卵状三角形，边缘呈锯齿状；叶柄长5～10 cm。雄花小，圆锥花序，长约15～25 cm，花被片5，黄绿色；雌花序球果状，径约5 mm，苞片纸质，卵状披针形，具白色绒毛。体轻，气微，味淡。
2.2 鉴别
2.2.1 显微鉴别
本品粉末灰绿色或绿色。淀粉粒较多，单粒类圆形，直径约8～20 μm，脐点不甚明显，点状或裂缝状，偏光显微镜下呈黑色十字形；复粒较多，由2-6分粒组成。草酸钙簇晶较多，大小相近，直径5～18 μm，偏光显微镜下呈多彩状。叶表皮中分布有很多含大型类圆形钟乳体的晶细胞，钟乳体直径约45～71 μm；表皮中可见类圆形的腺鳞。非腺毛1～2细胞，多为单细胞，壁上有时可见疣状突起。螺纹导管、网纹导管、具缘纹孔导管可见。导管或纤维旁常可见内含红棕色物的长管状细胞，直径11～55 μm。纤维成束或单个散在，两端较平截，见图1。
, http://www.100md.com
本品叶的表面观：上表皮细胞垂周壁略呈微波状弯曲，下表皮细胞垂周壁波状弯曲明显；上下表皮均分布有气孔，气孔不定式，副卫细胞4～5个。叶表皮中分布有很多含大型类圆形钟乳体的晶细胞；表皮中可见类椭圆形的腺鳞；有时可见单个散离的小腺毛，柄短。非腺毛众多，细长，由1～2细胞组成，先端细尖或呈钩状，有的基部细胞膨大，周围细胞呈放射状排列。草酸钙簇晶多见，常沿着叶脉分布，偏光显微镜下呈多彩状，见图2。
2.2.2 薄层色谱鉴别
2.2.2.1 对照品溶液的制备 取木犀草苷、大波斯菊苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制得每1 mL各含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末2 g，加70%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
, 百拇医药 2.2.2.3 薄层色谱条件及结果
照薄层色谱法(《中国药典》2010年版附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶3∶0.3)为展开剂，预饱和10 min，展开，取出，晾干，喷以1% 三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。
2.3 检查
2.3.1 水分测定
取供试品2 g(过2号筛)，精密称定，按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H水分测定法第一法测定。葎草水分为8.40%～11.61%，平均值为10.11%。
2.3.2 总灰分和酸不溶性灰分测定, 百拇医药(谢凡 吴迎春 李医明 徐红 王瑞 王峥涛)
[关键词]葎草药材；质量标准；显微鉴别；薄层鉴别；含量测定
葎草别名拉拉秧、锯子草、五爪龙等，始载于《唐本草》，为桑科植物葎草Humulus scandens.(Lour.)Merr.的干燥地上部分，具有清热解毒、利尿通淋之功效，用于肺热咳嗽、肺痈、虚热烦渴、热淋、水肿、小便不利、湿热泻痢、热毒疮疡等症[1-3]。葎草全草中含黄酮类、萜类、生物碱、挥发油、酸性物质等多种化学成分[4-6]，其中黄酮类化合物是从葎草全草中分离出的含量较高的成分[7]，且现代药理研究表明葎草中的黄酮类物质是其利水消肿、保护血管等药理作用的主要物质基础[8-9]。葎草为尿感宁颗粒等成方制剂的重要组成药味，是《中国药典》2010年版一部附录收录品种，只规定其基源，无鉴别项、检查项和对指标成分定性、定量检测，难以控制药材及其制剂的质量和保证临床用药的安全性和有效性。
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本研究首次建立葎草药材的质量控制方法和标准，包括性状描述、显微鉴别，水分、灰分测定，以木犀草苷和大波斯菊苷为指标成分的薄层色谱鉴别及高效液相色谱含量测定方法，为葎草药材及其制剂的质量控制提供科学依据。
1 材料
Agilent1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、检测器、工作站)；Linomat-Ⅵ薄层色谱自动点样器(瑞士CAMAG公司)；Reprostar 3薄层色谱摄像仪(瑞士CAMAG公司)；sartoriusBSA124S-CW电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；sartoriusBT 25 S电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)；SX2型箱式电炉(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)。
乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。HSG薄层色谱硅胶预制板(批号110601，烟台市化学工业研究所)。木犀草苷、大波斯菊苷对照品(上海中药标准化研究中心，纯度>98%)；16批葎草药材均为市售品和产地收集，由上海中药标准化研究中心吴立宏博士鉴定为桑科植物葎草H. scandens的干燥地上部分，详见表1。
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2 方法与结果
2.1 性状
本品为缠绕草本，茎、枝、叶柄均具倒钩刺。茎藤六角柱形，不易折断；叶为近肾状五角形掌状，5～7深裂，稀为3裂，基部心脏形，表面粗糙，具毛茸，裂片卵状三角形，边缘呈锯齿状；叶柄长5～10 cm。雄花小，圆锥花序，长约15～25 cm，花被片5，黄绿色；雌花序球果状，径约5 mm，苞片纸质，卵状披针形，具白色绒毛。体轻，气微，味淡。
2.2 鉴别
2.2.1 显微鉴别
本品粉末灰绿色或绿色。淀粉粒较多，单粒类圆形，直径约8～20 μm，脐点不甚明显，点状或裂缝状，偏光显微镜下呈黑色十字形；复粒较多，由2-6分粒组成。草酸钙簇晶较多，大小相近，直径5～18 μm，偏光显微镜下呈多彩状。叶表皮中分布有很多含大型类圆形钟乳体的晶细胞，钟乳体直径约45～71 μm；表皮中可见类圆形的腺鳞。非腺毛1～2细胞，多为单细胞，壁上有时可见疣状突起。螺纹导管、网纹导管、具缘纹孔导管可见。导管或纤维旁常可见内含红棕色物的长管状细胞，直径11～55 μm。纤维成束或单个散在，两端较平截，见图1。
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本品叶的表面观：上表皮细胞垂周壁略呈微波状弯曲，下表皮细胞垂周壁波状弯曲明显；上下表皮均分布有气孔，气孔不定式，副卫细胞4～5个。叶表皮中分布有很多含大型类圆形钟乳体的晶细胞；表皮中可见类椭圆形的腺鳞；有时可见单个散离的小腺毛，柄短。非腺毛众多，细长，由1～2细胞组成，先端细尖或呈钩状，有的基部细胞膨大，周围细胞呈放射状排列。草酸钙簇晶多见，常沿着叶脉分布，偏光显微镜下呈多彩状，见图2。
2.2.2 薄层色谱鉴别
2.2.2.1 对照品溶液的制备 取木犀草苷、大波斯菊苷对照品适量，精密称定，加70%甲醇制得每1 mL各含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2.2 供试品溶液的制备 取本品粉末2 g，加70%甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。
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照薄层色谱法(《中国药典》2010年版附录Ⅵ B)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶3∶0.3)为展开剂，预饱和10 min，展开，取出，晾干，喷以1% 三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。
2.3 检查
2.3.1 水分测定
取供试品2 g(过2号筛)，精密称定，按照《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ H水分测定法第一法测定。葎草水分为8.40%～11.61%，平均值为10.11%。
2.3.2 总灰分和酸不溶性灰分测定, 百拇医药(谢凡 吴迎春 李医明 徐红 王瑞 王峥涛)