基于HPLC—DAD指纹图谱的远志质量评价研究(1)
[摘要] 目的： 建立远志HPLC指纹图谱，评价远志药材、远志根心与不同采收或生长时间远志质量。方法： 采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相为乙腈和0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，检测波长314 nm，柱温30 ℃。采用相似度计算、聚类分析、主成分分析和神经网络模型对远志药材质量进行判别分析。结果：26 批不同产地远志药材中，相似度大于0.8的有24批；5批不同采收月份或生长时期的栽培远志药材中，相似度大于0.8的有4批；8批远志根心相似度均大于0. 875。聚类分析、主成分分析和神经网络模型对远志药材质量判别分析结果与相似度分析结果一致。结论：指纹图谱结合化学模式识别技术可以有效评价远志质量，在栽培远志、野生远志、不同采收月份或生长时期的远志与远志根心中，有效物质种类均相似，但各色谱峰面积不同，远志野生变家栽后，有效物质群含量与野生药材相似，远志根心各色谱峰峰面积远小于远志药材，远志有效物质群积累主要与采收月份有关，与生长月数关系不明显。
, 百拇医药
[关键词]远志；指纹图谱；质量评价；模式识别
远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd和卵叶远志P. sibirical L的干燥根，生产与流通中的药材主要为远志P. tenuifolia Willd。近年来，远志用药量逐年增大，但市售远志药材质量参差不齐，严重影响到饮片及制剂的临床疗效。远志中的化学成分主要有皂苷类、NFDE8酮类和糖类等，这些成分均具有比较明显的药理作用[1-2]。为了更加科学地控制远志药材的质量，建立远志药材多成分综合评价体系是非常必要的。目前，指纹图谱已成为能够为国内外广泛接受的中药质量评价模式，中药指纹图谱技术与现行单一指标成分评价相比，其所含信息是综合的、多层次的和具体量化的[3]，与传统方法相比，指纹图谱专属性更强，可用于已知或未知成分的分析，指纹图谱中宏量色谱数据的处理用直观的方法几乎是不可能的，化学计量学模式识别技术的飞速发展，为人们评价不同的复杂系统提供了很多有效方法。目前对远志指纹图谱的研究主要集中在指纹图谱方法的建立、真伪鉴别、道地性研究及炮制前后远志药效成分的变化[4-10]，缺少对栽培与野生远志指纹图谱整体性和模糊性的合理评价研究，对远志不同药用部位及采收时期的指纹图谱研究也不多。本研究通过建立远志药材HPLC-DAD指纹图谱，运用模式识别技术如相似度分析、聚类分析、主成分分析与神经网络等方法，对39批不同来源的野生远志、栽培远志、远志根心与不同采收月份或生长时期的远志指纹图谱的多维多息特征参数进行数据挖掘，旨在为合理评价远志质量提供理论参考和实践探索，以期更好地开发和利用我国远志资源，为远志规范化种植及新药源的扩大提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料
2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)，配有自动进样系统、柱温箱、在线真空脱氧机、2996二级阵列检测器(DAD)及Water化学色谱工作站(美国Waters公司)，Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；
甲醇，乙腈均为色谱纯，水为超纯水，磷酸、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等均为分析纯。
药材39份，其中不同产地野生或栽培远志药材26份，栽培远志不同生长期药材5份，远志根心8份。(表1，2)，全部药材均经成都中医药大学药学院万德光教授鉴定为远志科远志属植物远志P. tenuifolia Willd.或卵叶远志P. sibirica L.的干燥根皮或根心。
2 方法
2.1 供试品溶液的制备
, http://www.100md.com
精密称取过4号药典筛60 ℃下干燥至恒重的远志粉末2 g，置索氏提取器中，加甲醇100 mL，加热回流5 h，减压浓缩提取液，回收甲醇至干，残渣用70%甲醇溶解，转移并定容到10 mL量瓶中，即得供试品溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相[4]：乙腈(A)-0.05﹪磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，0～9 min，15%(A)，10～14 min，15%～20%(A)，15～34 min，20%～25%(A)，35～42 min，25%～29%(A)，43 min，35%(A)，44～56 min，35%～40%(A)，57～65 min，40%～45%(A)，65～70 min，45%～15%(A)；运行时间70 min；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1。
, 百拇医药
对远志样品进行全波长扫描，以峰数最多的检测波长314 nm为实验检测波长。
2.3 样品测定
取远志供试品溶液适量，过0.45 μm微孔滤膜，精密吸取续滤液15μL，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件分别测定，记录70 min HPLC色谱图。
2.4 数据处理
用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”(国家药典委员会编)进行图谱处理，计算样品相似度；用SPSS18.0软件进行聚类分析与主成分分析；用DPS7.05软件建立神经网络模型。
3 结果与分析
3.1 方法学考察
3.1.1 精密度试验 取同一批供试品溶液，连续进样6次，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD均不大于2.9%，表明试验仪器精密度良好。
3.1.2 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，3，6，9，12和24 h进样，测得各共有色谱峰相对峰面积与相对保留时间RSD均不大于2.9%，表明供试品溶液在24 h内稳定。, 百拇医药(赵云生 刘秀 毛福英 田洪岭 万德光)
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[关键词]远志；指纹图谱；质量评价；模式识别
远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd和卵叶远志P. sibirical L的干燥根，生产与流通中的药材主要为远志P. tenuifolia Willd。近年来，远志用药量逐年增大，但市售远志药材质量参差不齐，严重影响到饮片及制剂的临床疗效。远志中的化学成分主要有皂苷类、NFDE8酮类和糖类等，这些成分均具有比较明显的药理作用[1-2]。为了更加科学地控制远志药材的质量，建立远志药材多成分综合评价体系是非常必要的。目前，指纹图谱已成为能够为国内外广泛接受的中药质量评价模式，中药指纹图谱技术与现行单一指标成分评价相比，其所含信息是综合的、多层次的和具体量化的[3]，与传统方法相比，指纹图谱专属性更强，可用于已知或未知成分的分析，指纹图谱中宏量色谱数据的处理用直观的方法几乎是不可能的，化学计量学模式识别技术的飞速发展，为人们评价不同的复杂系统提供了很多有效方法。目前对远志指纹图谱的研究主要集中在指纹图谱方法的建立、真伪鉴别、道地性研究及炮制前后远志药效成分的变化[4-10]，缺少对栽培与野生远志指纹图谱整体性和模糊性的合理评价研究，对远志不同药用部位及采收时期的指纹图谱研究也不多。本研究通过建立远志药材HPLC-DAD指纹图谱，运用模式识别技术如相似度分析、聚类分析、主成分分析与神经网络等方法，对39批不同来源的野生远志、栽培远志、远志根心与不同采收月份或生长时期的远志指纹图谱的多维多息特征参数进行数据挖掘，旨在为合理评价远志质量提供理论参考和实践探索，以期更好地开发和利用我国远志资源，为远志规范化种植及新药源的扩大提供理论依据。
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1 材料
2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)，配有自动进样系统、柱温箱、在线真空脱氧机、2996二级阵列检测器(DAD)及Water化学色谱工作站(美国Waters公司)，Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；
甲醇，乙腈均为色谱纯，水为超纯水，磷酸、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇等均为分析纯。
药材39份，其中不同产地野生或栽培远志药材26份，栽培远志不同生长期药材5份，远志根心8份。(表1，2)，全部药材均经成都中医药大学药学院万德光教授鉴定为远志科远志属植物远志P. tenuifolia Willd.或卵叶远志P. sibirica L.的干燥根皮或根心。
2 方法
2.1 供试品溶液的制备
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精密称取过4号药典筛60 ℃下干燥至恒重的远志粉末2 g，置索氏提取器中，加甲醇100 mL，加热回流5 h，减压浓缩提取液，回收甲醇至干，残渣用70%甲醇溶解，转移并定容到10 mL量瓶中，即得供试品溶液。
2.2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相[4]：乙腈(A)-0.05﹪磷酸水溶液(B)，梯度洗脱，0～9 min，15%(A)，10～14 min，15%～20%(A)，15～34 min，20%～25%(A)，35～42 min，25%～29%(A)，43 min，35%(A)，44～56 min，35%～40%(A)，57～65 min，40%～45%(A)，65～70 min，45%～15%(A)；运行时间70 min；柱温30 ℃；流速1.0 mL·min-1。
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对远志样品进行全波长扫描，以峰数最多的检测波长314 nm为实验检测波长。
2.3 样品测定
取远志供试品溶液适量，过0.45 μm微孔滤膜，精密吸取续滤液15μL，注入高效液相色谱仪，照上述色谱条件分别测定，记录70 min HPLC色谱图。
2.4 数据处理
用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”(国家药典委员会编)进行图谱处理，计算样品相似度；用SPSS18.0软件进行聚类分析与主成分分析；用DPS7.05软件建立神经网络模型。
3 结果与分析
3.1 方法学考察
3.1.1 精密度试验 取同一批供试品溶液，连续进样6次，测得各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD均不大于2.9%，表明试验仪器精密度良好。
3.1.2 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0，3，6，9，12和24 h进样，测得各共有色谱峰相对峰面积与相对保留时间RSD均不大于2.9%，表明供试品溶液在24 h内稳定。, 百拇医药(赵云生 刘秀 毛福英 田洪岭 万德光)