朱砂雄黄在安宫牛黄丸对内毒素脑损伤大鼠促清醒中的作用及机制(1)
[摘要] 目的：探讨朱砂、雄黄的去留对安宫牛黄丸促清醒作用的影响及可能的机制。方法：将皮层放置永久电极的雄性SD大鼠分为6组：对照组、模型组、安宫牛黄丸(全方)高、低剂量组(AGNH，0.4，0.2 g·kg-1)、去朱砂雄黄安宫牛黄丸(简方)高、低剂量组(QZX-AGNH，0.32，0.16 g·kg-1)。连续灌胃给药3 d，末次给药后1 h，采用内毒素(LPS) 16 mg·kg-1尾静脉注射造成大鼠脑损伤。动态记录LPS注射后大鼠皮层脑电图，测定快波β波及慢波δ波的功率及相对功率。以LPS注射6 h的结果进行组间比较，并测定该时间点各组(除低剂量组)大鼠皮层和脑干乙酰胆碱含量(碱性羟胺比色法)及M胆碱受体亲和力(放射性配体结合法)。结果：全方高、低剂量可使β波活动增强，使其功率和相对功率增强，其中以高剂量组作用明显，即表现明显的脑电激活作用；简方的作用弱，仅简方高剂量可提高β波相对功率。全方高剂量可增加皮层M-R亲和力，同时增加脑干Ach的含量(同模型组比较P<0.05)；简方不明显。结论：全方可提高LPS损伤后皮层胆碱系统的功能；加强脑干胆碱系统对皮层的上行激活作用，提高皮层的活动水平，激活ECoG，从而促进机体的觉醒，简方的作用弱。因此，朱砂、雄黄可能在安宫牛黄丸促清醒作用中发挥重要作用，其机制可能与影响皮层和脑干胆碱能系统的功能相关。
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[关键词]安宫牛黄丸；朱砂；雄黄；促清醒
安宫牛黄丸是中医传统的“瘟病三宝”之一，具有清热解毒、镇惊开窍的功效，主治瘟病高热、神昏、中风、口眼歪斜、筋脉牵引、痰痫壅盛等。临床实践证明，安宫牛黄丸对各种原因所致的脑功能障碍及昏迷，都具有确切的促进清醒作用。但由于组方中朱砂、雄黄含有HgS和As2S2，且近年来关于安宫牛黄丸引起汞毒性肾病等临床毒副作用的报道不断出现，使人们对安宫牛黄丸使用的安全性及朱砂、雄黄在方中存在的合理性提出质疑。因此，朱砂、雄黄在安宫牛黄丸不同药理作用中存在的意义成为关注的焦点。
已有研究表明，安宫牛黄丸对氨昏迷动物能减轻或抑制其精神症状和皮层脑电图的恶化，并降低动物的死亡率，安宫牛黄丸对脑细胞有明显的保护作用[1]。含朱砂、雄黄的安宫牛黄丸可增加皮层神经元c-fos的表达，对皮层神经元有直接的激活作用，而去朱砂、雄黄的安宫牛黄丸对皮层神经元的活化作用明显减弱[2]。雄黄和安宫牛黄丸可拮抗LPS对体外培养的多巴胺能神经损伤[3]，抑制小胶质细胞释放炎症介质所致的炎症反应[4]。这些资料提示，朱砂、雄黄可能在安宫牛黄丸改善脑损伤中发挥一定作用。对朱砂、雄黄在安宫牛黄丸改善脑损伤、促清醒中的作用及机制进行深入研究，可为朱砂、雄黄在方中存在的合理性提供实验依据。
, 百拇医药
1 材料
1.1 动物 SD雄性大鼠，体重250～260 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK(京)2002-0003。
1.2 药品与试剂 安宫牛黄丸原料药(未加蜜，以下称全方，AGNH)，批号5014997；不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸原料药(未加蜜，以下称简方，QZX-AGNH)，批号5014996，均由同仁堂科技有限公司提供。脂多糖(LPS)，Sigma公司生产，批号055K4060。3H-二苯羟乙酸奎宁脂 ([3H]-quinuclidinylbenzilate，3H-QNB)，美国Amersham Life Science公司产品，比活为1.5 Bq(42Ci)·mmol-1；非标记二苯羟乙酸奎宁脂(QNB)。
1.3 仪器 牙科钻，澳大利亚产Powerlab4.24多道生物信号记录系统，不锈钢电极，大鼠固定器，22#鱼线。DIAX900型内切式匀浆器(德国Heidolph公司)；SZX恒温水浴振荡器(哈尔滨东方电控开关厂)；LS-6500液体闪烁测量仪(Beckman公司)；HIMACCP70型超速冷冻离心机(日本Hitachi公司)；WFZ UZ-2000型紫外-可见分光光度计(上海尤尼柯仪器厂)。
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2 方法
2.1 放置皮层永久性电极[5] 取雄性SD大鼠，ip10%的水合氯醛300 g·kg-1麻醉大鼠，暴露颅骨，在矢状缝左右两侧分别距前囟旁2 mm、前2 mm和旁2 mm，后7 mm，相当于左右额顶叶皮层的部位，进行颅骨钻孔，植入不锈钢“Z”字形电极，用牙托粉+502胶将电极固定，缝合头皮，大鼠每千克体重肌注青霉素G钠8万单位，每天1次，给药3 d，动物术后恢复1周。
2.2 动物分组及给药 动物恢复1周后，按脑电活动的频率，采用分层随机的方法将动物随机分6组，即对照组、LPS脑损伤模型组、全方高、低剂量组(AGNH-H 0.4 g·kg-1，AGNH-L 0.2 g·kg-1)、简方高、低剂量组(QZX-AGNH-H 0.32 g·kg-1，QZX-AGNH-L 0.16 g·kg-1)。全方低剂量相当于安宫牛黄丸临床等效量，高剂量为临床等效剂量的2倍，简方剂量的确定以全方为依据，除去全方中20%朱砂、雄黄计算得出。对照组和模型组分别灌胃蒸馏水，连续给药3 d，末次给药后1 h造模。
2.3 LPS脑损伤模型制备[6] 造模前大鼠禁食12 h，用大鼠固定器固定大鼠，尾静脉注射O55：B5 LPS 16 mg·kg-1，全部剂量分2次注射，2次间隔时间为1.5～2 h，每次注射时间为1 min，以第1次尾静脉注射为观察的起始时间，分别记录LPS注射1，2，4，6 h大鼠皮层脑电图。, 百拇医药(朱坤杰 孙建宁)
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[关键词]安宫牛黄丸；朱砂；雄黄；促清醒
安宫牛黄丸是中医传统的“瘟病三宝”之一，具有清热解毒、镇惊开窍的功效，主治瘟病高热、神昏、中风、口眼歪斜、筋脉牵引、痰痫壅盛等。临床实践证明，安宫牛黄丸对各种原因所致的脑功能障碍及昏迷，都具有确切的促进清醒作用。但由于组方中朱砂、雄黄含有HgS和As2S2，且近年来关于安宫牛黄丸引起汞毒性肾病等临床毒副作用的报道不断出现，使人们对安宫牛黄丸使用的安全性及朱砂、雄黄在方中存在的合理性提出质疑。因此，朱砂、雄黄在安宫牛黄丸不同药理作用中存在的意义成为关注的焦点。
已有研究表明，安宫牛黄丸对氨昏迷动物能减轻或抑制其精神症状和皮层脑电图的恶化，并降低动物的死亡率，安宫牛黄丸对脑细胞有明显的保护作用[1]。含朱砂、雄黄的安宫牛黄丸可增加皮层神经元c-fos的表达，对皮层神经元有直接的激活作用，而去朱砂、雄黄的安宫牛黄丸对皮层神经元的活化作用明显减弱[2]。雄黄和安宫牛黄丸可拮抗LPS对体外培养的多巴胺能神经损伤[3]，抑制小胶质细胞释放炎症介质所致的炎症反应[4]。这些资料提示，朱砂、雄黄可能在安宫牛黄丸改善脑损伤中发挥一定作用。对朱砂、雄黄在安宫牛黄丸改善脑损伤、促清醒中的作用及机制进行深入研究，可为朱砂、雄黄在方中存在的合理性提供实验依据。
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1.1 动物 SD雄性大鼠，体重250～260 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号SCXK(京)2002-0003。
1.2 药品与试剂 安宫牛黄丸原料药(未加蜜，以下称全方，AGNH)，批号5014997；不含朱砂雄黄的安宫牛黄丸原料药(未加蜜，以下称简方，QZX-AGNH)，批号5014996，均由同仁堂科技有限公司提供。脂多糖(LPS)，Sigma公司生产，批号055K4060。3H-二苯羟乙酸奎宁脂 ([3H]-quinuclidinylbenzilate，3H-QNB)，美国Amersham Life Science公司产品，比活为1.5 Bq(42Ci)·mmol-1；非标记二苯羟乙酸奎宁脂(QNB)。
1.3 仪器 牙科钻，澳大利亚产Powerlab4.24多道生物信号记录系统，不锈钢电极，大鼠固定器，22#鱼线。DIAX900型内切式匀浆器(德国Heidolph公司)；SZX恒温水浴振荡器(哈尔滨东方电控开关厂)；LS-6500液体闪烁测量仪(Beckman公司)；HIMACCP70型超速冷冻离心机(日本Hitachi公司)；WFZ UZ-2000型紫外-可见分光光度计(上海尤尼柯仪器厂)。
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2 方法
2.1 放置皮层永久性电极[5] 取雄性SD大鼠，ip10%的水合氯醛300 g·kg-1麻醉大鼠，暴露颅骨，在矢状缝左右两侧分别距前囟旁2 mm、前2 mm和旁2 mm，后7 mm，相当于左右额顶叶皮层的部位，进行颅骨钻孔，植入不锈钢“Z”字形电极，用牙托粉+502胶将电极固定，缝合头皮，大鼠每千克体重肌注青霉素G钠8万单位，每天1次，给药3 d，动物术后恢复1周。
2.2 动物分组及给药 动物恢复1周后，按脑电活动的频率，采用分层随机的方法将动物随机分6组，即对照组、LPS脑损伤模型组、全方高、低剂量组(AGNH-H 0.4 g·kg-1，AGNH-L 0.2 g·kg-1)、简方高、低剂量组(QZX-AGNH-H 0.32 g·kg-1，QZX-AGNH-L 0.16 g·kg-1)。全方低剂量相当于安宫牛黄丸临床等效量，高剂量为临床等效剂量的2倍，简方剂量的确定以全方为依据，除去全方中20%朱砂、雄黄计算得出。对照组和模型组分别灌胃蒸馏水，连续给药3 d，末次给药后1 h造模。
2.3 LPS脑损伤模型制备[6] 造模前大鼠禁食12 h，用大鼠固定器固定大鼠，尾静脉注射O55：B5 LPS 16 mg·kg-1，全部剂量分2次注射，2次间隔时间为1.5～2 h，每次注射时间为1 min，以第1次尾静脉注射为观察的起始时间，分别记录LPS注射1，2，4，6 h大鼠皮层脑电图。, 百拇医药(朱坤杰 孙建宁)