1.4 Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡 取处于对数生长期状态良好的细胞，加入0.25%胰蛋白酶消化，计数1.0×10⁶ 个/mL，制成细胞悬液，接种于6孔板中，置恒温CO₂培养箱中培养24 h。换用含3%血清的DMEM培养基，加入Aβ₂₅-35和药物继续培养24 h。胰酶消化，收集细胞，PBS洗涤2次，离心弃上清。加入500 μL的binding buffer悬浮细胞。加入5 μL Annexin V-FITC混匀后，加入5 μL propidium iodide，混匀。室温、避光、反应20 min。在1 h内，进行流式细胞仪的观察和检测。

    1.5 Western blot检测蛋白表达 加药处理细胞24 h后，收集细胞并用裂解液裂解细胞获得总蛋白。采用BCA试剂盒于562 nm处测定样品蛋白含量。然后，采用12%浓度的 SDS-PAGE分离总蛋白，蛋白质转移到PVDF膜，5%的脱脂奶粉室温封闭2 h。封闭过的膜用TBST洗涤3次。将膜放入杂交袋中，加入一抗4 ℃孵育过夜 ......