药用牡丹种子质量检验方法的研究(1)
[摘要] 该文参考国际植物种子检验规程和农作物种子检验规程的方法，测定了不同产地药用牡丹种子质量，探索药用牡丹种子质量检验方法，为制定药用牡丹种子检验规程和质量标准提供依据。初步建立了药用牡丹种子质量检验方法，药用牡丹种子净度分析送检样本最少7 000 g，试验本最少700 g；真实性鉴定采用种子外观形态比较；千粒重测定采用百粒法；含水量测定采用低恒温烘干法10 h；室温清水浸泡24 h，黑暗条件下昼夜变温层积(20 ℃，12 h和25 ℃，12 h) 60 d 后，用300 mg·L-1 GA3 浸泡种子24 h，以砂中作为发芽床，在 15 ℃光照条件下萌发，发芽首末次计数时间为12～60 d；生活力测定采用 TTC染色法。
[关键词] 药用牡丹；种子；质量检验方法
牡丹Paeonia suffruticosa Andr. 为毛茛科芍药属多年生木本植物，以其干燥根皮入药，具有清热凉血、活血化瘀等功效[1]，同时也是著名的观赏植物。药用牡丹在我国主要分布于安徽凤凰山一带、安徽亳州、山东菏泽、陕西商洛等地，目前均为人工栽培。
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目前药用牡丹种子的研究主要集中在牡丹种子休眠与萌发特性[2-6]、种子化学成分与药理活性[7-11]、组织培养[12-15]等方面，有关药用牡丹种子质量检验方法的研究尚未见报道。因此，本研究对药用牡丹种子的净度、千粒重、真实性鉴定、含水量、生活力的检测方法以及发芽条件等进行了系统研究，以期为制定药用牡丹种子检验规程和质量分级标准提供依据。
1 材料
实验所用药用牡丹种子于2013年7—8月采自安徽铜陵凤凰山、安徽南陵丫山、山东菏泽等3个产区的栽培居群，编号分别为FH，YS，HZ。经南京农业大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为毛茛科植物牡丹P. suffruticosa的种子。
2 方法
2.1 扦样
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根据药用牡丹种子的市场流通情况和单次可能的交易量，及净度分析试验样品不少于2 500粒种子，而送检样品的质量应超过净度分析量的10倍量的原则，确定药用牡丹种子批的最大质量和样品的最小质量。按“GB/T3543.2农作物种子检验规程”扦样方法[16]，采用“徒手减半法”扦取送检样品和试验样品。
2.2 净度分析
按“GB/T3543.3农作物种子检验规程”净度分析执行[16]。采用“徒手减半法”从3份药用牡丹种子中分取试验样品800 g，5次重复，在不损伤发芽率的基础上进行检查，直接挑选纯净种子。
2.3 真实性鉴定
参照“GB/T3543. 5-农作物种子检验规程”中真实性鉴定方法[16]。采用种子外观形态法，随机数取100粒种子，4次重复，逐粒观察药用牡丹种子形状、大小、光泽、光滑度、颜色以及种脐特征等并记录[17]。
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2.4 质量测定
分别采取百粒法、五百粒法和千粒法测定药用牡丹种子质量。分别称重记录，计算标准差及变异系数。①百粒法：随机从净种子中数取100粒，重复8次，分别记录百粒重，计算标准差及变异系数；②五百粒法：随机从净种子中数取500粒，重复3次，分别记录五百粒重，计算标准差及变异系数；③千粒法：随机从净种子中数取1 000粒，重复3次，分别记录千粒重，计算标准差及变异系数。
2.5 含水量测定
将药用牡丹种子横切后，分别采用高恒温烘干法和低恒温烘干法测定每份种子样品含水量。①高恒温烘干法：分别在(133±2) ℃高温条件下，设置1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 h 对种子水分损失量进行测定；②低恒温烘干法：分别在(105±2) ℃低恒温条件下，设置 4，8，10，12，14，16，18 h 计算种子水分损失量。以上试验每份处理重复4次，每次称重(5.0±0.05) g。
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种子含水量=[(烘前试样重-烘后试样重)/烘前试样重]×100%
2.6 发芽率测定
2.6.1 发芽前处理 清水浸泡种子24，48，72，96 h 后，将种子和河沙按1∶3混匀，于20 ℃，12 h和25 ℃，12 h(全程黑暗)培养箱下层积。待胚根长度大于4 cm时，用300 mg·L-1的GA3 溶液浸泡24 h，以“砂中”作为发芽床，于15 ℃(12 h光照、暗处理12 h)培养箱中萌发。
2.6.2 发芽床的确定 经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1 GA3 溶液浸泡24 h后，将种子分别置于不同发芽床(砂上加1层滤纸、褶纸间和砂中)，在15 ℃，12 h光照培养箱中发芽。
2.6.3 发芽温度的确定 经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1 GA3 溶液浸泡24 h后，分别置于10，15，20，25 ℃恒温，12 h光照条件下培养，以“砂中”为发芽床。
以上发芽试验，每处理300粒种子，3次重复，每重复100粒种子。
2.6.4 发芽光照的确定 试验样本经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1GA3 溶液浸泡24 h后，以砂中为发芽床，将生根种子置于15 ℃(12 h光照、暗处理12 h)培养箱中发芽。
2.6.5 发芽计数时间的确定 以种子根茎处胚芽伸出2 mm时的天数作为初次计数时间，以种子萌发数达到最高，以后再无萌发种子出现时的天数作为末次计数时间。, 百拇医药(曹亚悦 朱再标 郭巧生 刘丽 王长林)
[关键词] 药用牡丹；种子；质量检验方法
牡丹Paeonia suffruticosa Andr. 为毛茛科芍药属多年生木本植物，以其干燥根皮入药，具有清热凉血、活血化瘀等功效[1]，同时也是著名的观赏植物。药用牡丹在我国主要分布于安徽凤凰山一带、安徽亳州、山东菏泽、陕西商洛等地，目前均为人工栽培。
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目前药用牡丹种子的研究主要集中在牡丹种子休眠与萌发特性[2-6]、种子化学成分与药理活性[7-11]、组织培养[12-15]等方面，有关药用牡丹种子质量检验方法的研究尚未见报道。因此，本研究对药用牡丹种子的净度、千粒重、真实性鉴定、含水量、生活力的检测方法以及发芽条件等进行了系统研究，以期为制定药用牡丹种子检验规程和质量分级标准提供依据。
1 材料
实验所用药用牡丹种子于2013年7—8月采自安徽铜陵凤凰山、安徽南陵丫山、山东菏泽等3个产区的栽培居群，编号分别为FH，YS，HZ。经南京农业大学中药材研究所郭巧生教授鉴定为毛茛科植物牡丹P. suffruticosa的种子。
2 方法
2.1 扦样
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根据药用牡丹种子的市场流通情况和单次可能的交易量，及净度分析试验样品不少于2 500粒种子，而送检样品的质量应超过净度分析量的10倍量的原则，确定药用牡丹种子批的最大质量和样品的最小质量。按“GB/T3543.2农作物种子检验规程”扦样方法[16]，采用“徒手减半法”扦取送检样品和试验样品。
2.2 净度分析
按“GB/T3543.3农作物种子检验规程”净度分析执行[16]。采用“徒手减半法”从3份药用牡丹种子中分取试验样品800 g，5次重复，在不损伤发芽率的基础上进行检查，直接挑选纯净种子。
2.3 真实性鉴定
参照“GB/T3543. 5-农作物种子检验规程”中真实性鉴定方法[16]。采用种子外观形态法，随机数取100粒种子，4次重复，逐粒观察药用牡丹种子形状、大小、光泽、光滑度、颜色以及种脐特征等并记录[17]。
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2.4 质量测定
分别采取百粒法、五百粒法和千粒法测定药用牡丹种子质量。分别称重记录，计算标准差及变异系数。①百粒法：随机从净种子中数取100粒，重复8次，分别记录百粒重，计算标准差及变异系数；②五百粒法：随机从净种子中数取500粒，重复3次，分别记录五百粒重，计算标准差及变异系数；③千粒法：随机从净种子中数取1 000粒，重复3次，分别记录千粒重，计算标准差及变异系数。
2.5 含水量测定
将药用牡丹种子横切后，分别采用高恒温烘干法和低恒温烘干法测定每份种子样品含水量。①高恒温烘干法：分别在(133±2) ℃高温条件下，设置1，2，3，4，5，6，7，8，9，10 h 对种子水分损失量进行测定；②低恒温烘干法：分别在(105±2) ℃低恒温条件下，设置 4，8，10，12，14，16，18 h 计算种子水分损失量。以上试验每份处理重复4次，每次称重(5.0±0.05) g。
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种子含水量=[(烘前试样重-烘后试样重)/烘前试样重]×100%
2.6 发芽率测定
2.6.1 发芽前处理 清水浸泡种子24，48，72，96 h 后，将种子和河沙按1∶3混匀，于20 ℃，12 h和25 ℃，12 h(全程黑暗)培养箱下层积。待胚根长度大于4 cm时，用300 mg·L-1的GA3 溶液浸泡24 h，以“砂中”作为发芽床，于15 ℃(12 h光照、暗处理12 h)培养箱中萌发。
2.6.2 发芽床的确定 经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1 GA3 溶液浸泡24 h后，将种子分别置于不同发芽床(砂上加1层滤纸、褶纸间和砂中)，在15 ℃，12 h光照培养箱中发芽。
2.6.3 发芽温度的确定 经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1 GA3 溶液浸泡24 h后，分别置于10，15，20，25 ℃恒温，12 h光照条件下培养，以“砂中”为发芽床。
以上发芽试验，每处理300粒种子，3次重复，每重复100粒种子。
2.6.4 发芽光照的确定 试验样本经湿沙层积60 d、胚根长度大于4 cm种子经300 mg·L-1GA3 溶液浸泡24 h后，以砂中为发芽床，将生根种子置于15 ℃(12 h光照、暗处理12 h)培养箱中发芽。
2.6.5 发芽计数时间的确定 以种子根茎处胚芽伸出2 mm时的天数作为初次计数时间，以种子萌发数达到最高，以后再无萌发种子出现时的天数作为末次计数时间。, 百拇医药(曹亚悦 朱再标 郭巧生 刘丽 王长林)