欧李种子质量检验规程及分级标准研究(1)
[摘要] 欧李作为郁李仁的重要基原之一，到目前为止，其种子质量检验规程和分级标准仍未建立。该研究通过对欧李种子进行扦样、净度、千粒重、含水量、生活力和发芽率等指标测定条件的研究，建立了适合欧李种子自身特点的检验规程。用建立的检验规程对50份取自不同欧李主产区的欧李种子进行检验，通过聚类分析制定了欧李种子的质量分级标准。最终将欧李种子分成3个等级：1级种子的发芽率≥68%，千粒重≥383 g，净度≥94%，含水量≤5%；2级种子发芽率≥26%，千粒重≥266 g，净度≥73%，含水量≤9%；3级种子发芽率≥10%，千粒重≥208 g，净度≥50%，含水量≤13%。
[关键词] 欧李；种子；检验规程；分级标准
郁李仁是一种常用中药材，为蔷薇科植物欧李Prunus humilis Bge、郁李P. japonica Thunb或长柄扁桃P. pedunculata Maxim的干燥成熟种子，具有润肠通便、下气利水等功效，用于治疗津枯肠燥、食积气滞、腹胀便秘、水肿、脚气、小便不利等[1]。欧李为蔷薇科樱属落叶小灌木，其干燥成熟种子是郁李仁的一种重要的药材基原。我国欧李野生变家种工作已相继开展，本课题组已选育出欧李新品种“京欧1号”、“京欧2号”[2-3]，其栽培面积逐渐扩大[4]。目前，欧李还未建立相应的种子检验规程和质量分级标准，无法对市场上的种子进行检验，而种子质量良莠不齐，造成了种子市场混乱，严重影响了欧李产业的发展及郁李仁药材质量的稳定。因此，制定规范化的种子质量分级标准非常必要。本研究参照《农作物种子检验规程》[5]，对反映欧李种子质量的主要指标进行了研究，制定了欧李种子质量检验规程及种子质量分级标准。
, 百拇医药
1 材料
实验共收集欧李种子50份，分别来自吉林、辽宁、内蒙古、北京、河北、山东、山西、陕西、河南等欧李的主产区，经北京中医药大学刘春生教授鉴定为欧李P. humilis种子，收集时间为2013年9月至11月，种子具体信息详见表1。
2 方法
2.1 质量检验规程研究
2.1.1 扦样 取编号24，35，50的试样，分别采用机械分样器法(大号钟鼎式分样器)和徒手减半法分取试验样品，取样时根据欧李种子的市场流通情况，单次可能的交易量，净度分析试验样品不少于2 500粒种子及送验样品为试验样品10倍量确定欧李种子样品的最小取样质量。
2.1.2 净度分析 取编号24，35，50的试样，分别采用1份全试样法和2份半试样法测定种子的净度。1份全试样法将试样称重后，将净种子、其他植物种子、杂质分开后分别称重，计算各成分的百分率；2份半试样法将试样称重后，对每一份半试样所有成分分别进行计算，并计算各成分的平均百分率。将分析后的各种成分质量之和与原始质量比较，核对分析期间物质有无增失，若增失差距超过原始质量的5%，则必须重做。2份半试样法，分析后任一成分的相差不得超过GB/T 3543.3中的重复分析间的容许差距。小数位数与GB/T 3543.3中的规定相同。
, 百拇医药
2.1.3 千粒重测定 取编号24，35，50净度分析后的种子分别采用百粒法、五百粒法和千粒法测定种子千粒重。百粒法每种种子8次重复，每次重复100粒；五百粒法3次重复，每次重复500粒；千粒法3次重复，每次重复1 000粒。种子的变异系数不应超过4.0，小数位数与GB/T 3543.3中表1的规定相同。
2.1.4 含水量测定 取编号24，35，50净度分析后的种子分别采用高恒温烘干法(133±2) ℃与低恒温烘干法(103±2) ℃进行含水量测定。高恒温烘干法：每隔1 h取出试样放入干燥器内冷却至室温(约30～45 min)后称重，总烘干时间为4 h。低恒温烘干法烘干5，10，15，20 h后取出称重。每处理约5 g种子精确称重，2次重复。小数位数参考GB/T 3543.6。
2.1.5 自然吸胀特性 取编号24，50净度分析后的种子各2份，每份约5.0 g，精确称重，在蒸馏水中浸种0.5，1，2，3，4，5，6，12，24，36，48，60，72，84，96 h后取出，用吸水纸吸干水分后称重，考察种子自然吸胀特性。
, 百拇医药
2.1.6 生活力测定 取编号为50的种子用蒸馏水浸泡72 h，使种子充分吸胀后沿中轴纵切，使胚和胚乳露出。染色条件采用3因素3 水平L9 ( 34 ) 的正交试验设计。四唑染色时间为1，3，5 h，四唑浓度设0.2%，0.4%，0.6%，染色温度为25，30，35 ℃。3次重复，每重复100粒种子。染色结束后，沥去溶液，用清水冲洗3次，置于培养皿中逐一检查，计算着色率，小数位数参考GB/T 3543.7。凡胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子[6]。
2.1.7 发芽率测定 取净度分析后的种子室温条件下用蒸馏水浸泡72 h使种子充分吸胀，然后将种子与湿沙按1∶4充分混匀，再将种子埋于地下低温沙藏60 d，挖出后置于沙床上，在25 ℃条件下发芽。待不再有新芽冒出时统计未发芽种子数与发芽种子数，计算发芽率，小数位数参考GB/T 3543.4。每份试样3次重复，每次重复100粒。
2.2 质量分级标准研究
采用上述研究确定的质量检验规程对收集的50份欧李种子进行净度、千粒重、含水量、生活力、发芽率等指标的测定。使用SPSS 19.0软件的K均值聚类对数据进行分析。
3 结果与分析
3.1 质量检验规程结果分析
3.1.1 扦样 机械分样器法和徒手减半法均能分得符合实验需求的种子，但机械分样器法需要额外购买仪器，并且实际操作中的灵活性不及徒手减半法，因此采用徒手减半法分取试验样品。送检样品最少为8 200 g，净度分析试样最少为820 g(2 500粒种子重)。, 百拇医药(文浩 任广喜 高雅 罗隽 刘春生 李卫东)
[关键词] 欧李；种子；检验规程；分级标准
郁李仁是一种常用中药材，为蔷薇科植物欧李Prunus humilis Bge、郁李P. japonica Thunb或长柄扁桃P. pedunculata Maxim的干燥成熟种子，具有润肠通便、下气利水等功效，用于治疗津枯肠燥、食积气滞、腹胀便秘、水肿、脚气、小便不利等[1]。欧李为蔷薇科樱属落叶小灌木，其干燥成熟种子是郁李仁的一种重要的药材基原。我国欧李野生变家种工作已相继开展，本课题组已选育出欧李新品种“京欧1号”、“京欧2号”[2-3]，其栽培面积逐渐扩大[4]。目前，欧李还未建立相应的种子检验规程和质量分级标准，无法对市场上的种子进行检验，而种子质量良莠不齐，造成了种子市场混乱，严重影响了欧李产业的发展及郁李仁药材质量的稳定。因此，制定规范化的种子质量分级标准非常必要。本研究参照《农作物种子检验规程》[5]，对反映欧李种子质量的主要指标进行了研究，制定了欧李种子质量检验规程及种子质量分级标准。
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1 材料
实验共收集欧李种子50份，分别来自吉林、辽宁、内蒙古、北京、河北、山东、山西、陕西、河南等欧李的主产区，经北京中医药大学刘春生教授鉴定为欧李P. humilis种子，收集时间为2013年9月至11月，种子具体信息详见表1。
2 方法
2.1 质量检验规程研究
2.1.1 扦样 取编号24，35，50的试样，分别采用机械分样器法(大号钟鼎式分样器)和徒手减半法分取试验样品，取样时根据欧李种子的市场流通情况，单次可能的交易量，净度分析试验样品不少于2 500粒种子及送验样品为试验样品10倍量确定欧李种子样品的最小取样质量。
2.1.2 净度分析 取编号24，35，50的试样，分别采用1份全试样法和2份半试样法测定种子的净度。1份全试样法将试样称重后，将净种子、其他植物种子、杂质分开后分别称重，计算各成分的百分率；2份半试样法将试样称重后，对每一份半试样所有成分分别进行计算，并计算各成分的平均百分率。将分析后的各种成分质量之和与原始质量比较，核对分析期间物质有无增失，若增失差距超过原始质量的5%，则必须重做。2份半试样法，分析后任一成分的相差不得超过GB/T 3543.3中的重复分析间的容许差距。小数位数与GB/T 3543.3中的规定相同。
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2.1.3 千粒重测定 取编号24，35，50净度分析后的种子分别采用百粒法、五百粒法和千粒法测定种子千粒重。百粒法每种种子8次重复，每次重复100粒；五百粒法3次重复，每次重复500粒；千粒法3次重复，每次重复1 000粒。种子的变异系数不应超过4.0，小数位数与GB/T 3543.3中表1的规定相同。
2.1.4 含水量测定 取编号24，35，50净度分析后的种子分别采用高恒温烘干法(133±2) ℃与低恒温烘干法(103±2) ℃进行含水量测定。高恒温烘干法：每隔1 h取出试样放入干燥器内冷却至室温(约30～45 min)后称重，总烘干时间为4 h。低恒温烘干法烘干5，10，15，20 h后取出称重。每处理约5 g种子精确称重，2次重复。小数位数参考GB/T 3543.6。
2.1.5 自然吸胀特性 取编号24，50净度分析后的种子各2份，每份约5.0 g，精确称重，在蒸馏水中浸种0.5，1，2，3，4，5，6，12，24，36，48，60，72，84，96 h后取出，用吸水纸吸干水分后称重，考察种子自然吸胀特性。
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2.1.6 生活力测定 取编号为50的种子用蒸馏水浸泡72 h，使种子充分吸胀后沿中轴纵切，使胚和胚乳露出。染色条件采用3因素3 水平L9 ( 34 ) 的正交试验设计。四唑染色时间为1，3，5 h，四唑浓度设0.2%，0.4%，0.6%，染色温度为25，30，35 ℃。3次重复，每重复100粒种子。染色结束后，沥去溶液，用清水冲洗3次，置于培养皿中逐一检查，计算着色率，小数位数参考GB/T 3543.7。凡胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子[6]。
2.1.7 发芽率测定 取净度分析后的种子室温条件下用蒸馏水浸泡72 h使种子充分吸胀，然后将种子与湿沙按1∶4充分混匀，再将种子埋于地下低温沙藏60 d，挖出后置于沙床上，在25 ℃条件下发芽。待不再有新芽冒出时统计未发芽种子数与发芽种子数，计算发芽率，小数位数参考GB/T 3543.4。每份试样3次重复，每次重复100粒。
2.2 质量分级标准研究
采用上述研究确定的质量检验规程对收集的50份欧李种子进行净度、千粒重、含水量、生活力、发芽率等指标的测定。使用SPSS 19.0软件的K均值聚类对数据进行分析。
3 结果与分析
3.1 质量检验规程结果分析
3.1.1 扦样 机械分样器法和徒手减半法均能分得符合实验需求的种子，但机械分样器法需要额外购买仪器，并且实际操作中的灵活性不及徒手减半法，因此采用徒手减半法分取试验样品。送检样品最少为8 200 g，净度分析试样最少为820 g(2 500粒种子重)。, 百拇医药(文浩 任广喜 高雅 罗隽 刘春生 李卫东)