滴水珠原生质体的分离纯化与植株再生(3)
酶液的组成、浓度配比、酶解温度和时间对原生质体分离有很大的影响[9]。本实验采用1.0%纤维素酶+0.1%果胶酶+13% CPW配制的酶液组合(pH为6.0),于28 ℃酶解4 h,滴水珠原生质体的产量为5.1×105个/g,活力大于75%,符合原生质体培养和细胞融合的标准,为下一步实验奠定基础。本研究以25%蔗糖等密度上浮离心法纯化滴水珠原生质体,500 r·min-1离心10 min,获得滴水珠原生质体产量高达5.1×105个/g。
在一定范围内, 原生质体具有较强的恢复分裂能力,一般密度以5×104~1×105个/mL为宜[10]。本实验比较了4种用于培养滴水珠原生质体的培养基,在MS干粉培养基上培养没有观察到细胞分裂 结果,仅自制的MS获得了较好的滴水珠植株再生效果 ......
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