赤芝孢子粉和子实体主要化学成分变异规律研究(1)
[摘要] 目的：揭示产地、品种、采收部位和潮次、破壁技术对赤芝孢子粉和子实体中总三萜、总多糖、总蛋白含量的影响。方法：收集龙芝1号、沪农1号、市售赤芝孢子粉和子实体，分别采用硫酸-蒽酮比色法、香草醛-冰醋酸比色法和Lowry 法测定其中总多糖、总三萜、总蛋白的含量。结果：全国6个主产区的破壁孢子粉总多糖为0.40%～2.25%，总三萜为1.36%～3.15%，总蛋白为0.74%～1.91%；浙江主栽赤芝品种子实体总多糖、总三萜、总蛋白质量分数分别为0.25%～1.42%，0.44%～1.42%，1.82%～3.67%，未破壁孢子粉分别为0.41%～0.91%，0.09%～0.12%，0.78%～0.90%，破壁孢子粉分别为1.03～2.25%，1.89%～3.15%， 0.96%～1.04%。结论：全国不同主产区的灵芝破壁孢子粉化学成分含量存在显著差异，浙江产区总多糖和总三萜含量较高，福建产区总蛋白含量较高；浙江主栽赤芝品种龙芝1号总三萜含量较高，沪农1号总多糖含量较高；破壁孢子粉中总三萜与总多糖含量高于子实体，子实体菌柄中总多糖含量大多高于菌盖，菌盖中总三萜含量显著高于菌柄；2潮采收的菌盖和菌柄中总多糖含量高于1潮相应的部位，但总三萜含量大多低于1潮；孢子粉破壁可显著提高总三萜和总多糖的提取和溶出率。
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[关键词] 灵芝；孢子粉；子实体；含量测定
赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst. 为担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，是传统中药材灵芝的主要来源之一[1]，具有益气血、安心神、健脾胃的功效，主治虚劳、心悸、失眠、头晕、神疲乏力、久咳气喘、冠心病、肿瘤等疾病[2]。灵芝孢子是灵芝子实体发育后期弹射释放出的生殖细胞，近年来随着高产孢子粉菌株及品种的筛选与推广、套筒采集技术的发明与应用，灵芝孢子粉的产量大幅度提高，药用价值日益受到重视[3]。灵芝中三萜、多糖和蛋白类化合物是孢子粉和子实体中均存在的重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、降血脂、抗炎症反应、免疫调节等作用[4-7]。中国灵芝的产量占世界前列，目前的主要栽培区一是主产袋料灵芝的山东等地；二是以小枝条填充杂木屑栽培灵芝的安徽等地；三是以段木栽培灵芝的浙江、福建、吉林等地[8-10]。浙江龙泉市具有良好的自然地理环境和丰富的阔叶林资源，其气候条件非常适合灵芝生长，被国务院授予“中华灵芝第一乡”。本研究通过测定不同主产地、不同主栽品种和采收潮次的赤芝孢子粉和子实体的菌盖、菌柄中总三萜、总多糖、总蛋白含量，为灵芝产品质量评价及有效利用提供理论依据。
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1 材料与方法
1.1 材料
紫外-可见分光光度计(Shimadzu UV-2600，日本岛津公司)；电热恒温水浴锅(DK-S24，上海森信实验仪器有限公司)；电子分析天平(AB104-N，梅特勒托利多仪器上海有限公司)；齐墩果酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号110709-200505)、D-葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号110833-200503)、牛血清蛋白对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号20120401)；Lowry法蛋白含量测定试剂盒(上海荔达生物科技有限公司，批号PRL000100)；二氯甲烷、香草醛、冰乙酸、高氯酸、浓硫酸、蒽酮、无水乙醇均为分析纯；蒸馏水自制。
供试市售灵芝破壁孢子粉分别产自浙江、上海、福建、山东、安徽、吉林，购于杭州超市。供试浙江省主栽赤芝品种龙芝1号和沪农1号，2012年6月种植于龙泉市栽培基地，当年9～10月采收第1潮的孢子粉和子实体，次年7～8月采收第2潮，其中孢子粉采用孢子粉收集器采收[3]，去除孢子粉开始弹射4～5 d及末期的孢子粉，采用低温破壁技术，破壁率达到98%以上。供试样品均于50 ℃干燥箱中烘干，子实体粉碎，干燥器中保存。本试验样品经浙江农林大学斯金平教授鉴定，均为G. lucidum。
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1.2 方法
1.2.1 供试品溶液的制备
1.2.1.1 总三萜供试品溶液的制备 精密称取供试品0.3 g，用干燥滤纸和棉线包扎好，置索氏提取器中，加二氯甲烷150 mL，于55 ℃下连续回流提取4 h，提取液减压浓缩，分别定容至100 mL(破壁孢子粉)，50 mL(子实体)，10 mL(孢子粉)。各取1.0 mL进行后续测定。
1.2.1.2 总多糖供试品溶液制备 孢子粉与子实体供试品溶液的制备均参照2010年版《中国药典》灵芝含量测定项下要求进行操作[1]，其中孢子粉提取时间经2，4，6，8 h连续回流提取比较，最终确定为6 h最佳。
1.2.1.3 总蛋白供试品溶液的制备 取样品粉末约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加蒸馏水90 mL，电加热器回流提取至无色，提取液转移至100 mL量瓶中，定容。取8 mL提取液于10 mL离心管中以8 000 r·min-1离心15 min，取出上清液待用。分别取0.5 mL(子实体)或1.0 mL(孢子粉)进行后续测定。
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1.2.2 对照品溶液的制备
1.2.2.1 总三萜对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，即得0.2 g·L-1的齐墩果酸对照品溶液。
1.2.2.2 总多糖对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品5.0 mg，置50 mL量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，即得0.1 g·L-1的葡萄糖对照品溶液。
1.2.2.3 总蛋白对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的牛血清蛋白对照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，即得0.25 g·L-1的牛血清蛋白对照品溶液。, 百拇医药(李静静 胡晓琴 张新凤 刘京晶 曹隆枢)
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[关键词] 灵芝；孢子粉；子实体；含量测定
赤芝Ganoderma lucidum (Leyss. ex Fr.) Karst. 为担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，是传统中药材灵芝的主要来源之一[1]，具有益气血、安心神、健脾胃的功效，主治虚劳、心悸、失眠、头晕、神疲乏力、久咳气喘、冠心病、肿瘤等疾病[2]。灵芝孢子是灵芝子实体发育后期弹射释放出的生殖细胞，近年来随着高产孢子粉菌株及品种的筛选与推广、套筒采集技术的发明与应用，灵芝孢子粉的产量大幅度提高，药用价值日益受到重视[3]。灵芝中三萜、多糖和蛋白类化合物是孢子粉和子实体中均存在的重要的生物活性物质，具有抗肿瘤、降血脂、抗炎症反应、免疫调节等作用[4-7]。中国灵芝的产量占世界前列，目前的主要栽培区一是主产袋料灵芝的山东等地；二是以小枝条填充杂木屑栽培灵芝的安徽等地；三是以段木栽培灵芝的浙江、福建、吉林等地[8-10]。浙江龙泉市具有良好的自然地理环境和丰富的阔叶林资源，其气候条件非常适合灵芝生长，被国务院授予“中华灵芝第一乡”。本研究通过测定不同主产地、不同主栽品种和采收潮次的赤芝孢子粉和子实体的菌盖、菌柄中总三萜、总多糖、总蛋白含量，为灵芝产品质量评价及有效利用提供理论依据。
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1 材料与方法
1.1 材料
紫外-可见分光光度计(Shimadzu UV-2600，日本岛津公司)；电热恒温水浴锅(DK-S24，上海森信实验仪器有限公司)；电子分析天平(AB104-N，梅特勒托利多仪器上海有限公司)；齐墩果酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号110709-200505)、D-葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号110833-200503)、牛血清蛋白对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号20120401)；Lowry法蛋白含量测定试剂盒(上海荔达生物科技有限公司，批号PRL000100)；二氯甲烷、香草醛、冰乙酸、高氯酸、浓硫酸、蒽酮、无水乙醇均为分析纯；蒸馏水自制。
供试市售灵芝破壁孢子粉分别产自浙江、上海、福建、山东、安徽、吉林，购于杭州超市。供试浙江省主栽赤芝品种龙芝1号和沪农1号，2012年6月种植于龙泉市栽培基地，当年9～10月采收第1潮的孢子粉和子实体，次年7～8月采收第2潮，其中孢子粉采用孢子粉收集器采收[3]，去除孢子粉开始弹射4～5 d及末期的孢子粉，采用低温破壁技术，破壁率达到98%以上。供试样品均于50 ℃干燥箱中烘干，子实体粉碎，干燥器中保存。本试验样品经浙江农林大学斯金平教授鉴定，均为G. lucidum。
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1.2 方法
1.2.1 供试品溶液的制备
1.2.1.1 总三萜供试品溶液的制备 精密称取供试品0.3 g，用干燥滤纸和棉线包扎好，置索氏提取器中，加二氯甲烷150 mL，于55 ℃下连续回流提取4 h，提取液减压浓缩，分别定容至100 mL(破壁孢子粉)，50 mL(子实体)，10 mL(孢子粉)。各取1.0 mL进行后续测定。
1.2.1.2 总多糖供试品溶液制备 孢子粉与子实体供试品溶液的制备均参照2010年版《中国药典》灵芝含量测定项下要求进行操作[1]，其中孢子粉提取时间经2，4，6，8 h连续回流提取比较，最终确定为6 h最佳。
1.2.1.3 总蛋白供试品溶液的制备 取样品粉末约2 g，精密称定，置索氏提取器中，加蒸馏水90 mL，电加热器回流提取至无色，提取液转移至100 mL量瓶中，定容。取8 mL提取液于10 mL离心管中以8 000 r·min-1离心15 min，取出上清液待用。分别取0.5 mL(子实体)或1.0 mL(孢子粉)进行后续测定。
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1.2.2 对照品溶液的制备
1.2.2.1 总三萜对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，用二氯甲烷溶解并稀释至刻度，即得0.2 g·L-1的齐墩果酸对照品溶液。
1.2.2.2 总多糖对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的葡萄糖对照品5.0 mg，置50 mL量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，即得0.1 g·L-1的葡萄糖对照品溶液。
1.2.2.3 总蛋白对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的牛血清蛋白对照品12.5 mg，置50 mL量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，即得0.25 g·L-1的牛血清蛋白对照品溶液。, 百拇医药(李静静 胡晓琴 张新凤 刘京晶 曹隆枢)