石榴皮在炒炭过程中没食子酸和鞣花酸含量变化规律的研究(1)
[摘要]针对目前石榴皮炭饮片炮制程度的判断仍然是靠外观性状，缺乏内在质量控制指标的现状，该文通过研究建立了HPLC同时测定石榴皮和石榴皮炭饮片中没食子酸和鞣花酸的含量，并采用该方法对石榴皮和不同炮制程度石榴皮炭中二者的含量情况进行了测定，研究发现，没食子酸和鞣花酸的含量在石榴皮炒炭过程中呈现先升高后降低的变化规律，在炮制程度适中时含量最高。该结果提示，没食子酸和鞣花酸含量可以作为内在质量指标控制石榴皮的炒炭程度。
[关键词]石榴皮；炒炭；没食子酸；鞣花酸
石榴皮为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，在我国药用历史悠久，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效[1]。在具体实践中，石榴皮须经过依法炮制，制成不同规格的饮片方能应用，目前应用最普遍的包括生品和石榴皮炭2种[2-4]。石榴皮生品长于驱虫、涩精、止带，多用于虫积腹痛、滑精、白带、脱肛、疥癣。石榴皮炭较生品收涩力增强，多用于久泻、久痢、崩漏[4]。在目前对石榴皮炭饮片炮制程度的判断仍然是靠外观性状，缺乏内在质量控制指标。石榴皮富含鞣质类成分，主要有没食子酸、鞣花酸、安石榴苷等成分[5]，且鞣质成分是影响石榴皮质量的主要因素[6-7]，曾有研究表明，加热炮制对石榴皮中没食子酸、鞣花酸和鞣质含量有显著影响[8]。为更好地控制饮片质量和石榴皮炭炮制程度，本实验通过研究建立了HPLC同时测定饮片中没食子酸和鞣花酸的含量，与传统的总鞣质含量测定方法相比，更加简便快捷。采用建立的含量测定方法对石榴皮生品和不同炮制程度的石榴皮炭进行了含量测定和比较，分析了没食子酸和鞣花酸的含量在炒炭过程中的变化规律。本研究可为控制石榴皮炭炮制程度提供有价值的内在质量控制指标。
, 百拇医药
1材料
安捷伦Agilent 1200型液相色谱仪，G1315B检测器，1/10万电子天平(Sartorius R200D，德国)。LC-350A超声波中药处理机(济宁市中区鲁超仪器厂)。中药炮制控温炉(哈尔滨市测电器厂)。
试验用石榴皮饮片是市售饮片，产地山东，经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为石榴科植物石榴P. granatum L.的干燥果皮。没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号110831-200302)，鞣花酸对照品(Alfa Aesar，批号10149850)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，甲醇、磷酸均为分析纯。
2方法与结果
2.1石榴皮炭样品的制备
取净石榴皮饮片150 g，置预热至400 ℃的中药炮制控温炉中，分别炒制一定时间(10，20，30，35 min)，制备成不同炮制程度的石榴皮炭饮片。炮制10 min的石榴皮炭饮片与传统要求相比较轻，未达到传统要求的炮制程度，20 min可达到传统炮制要求，即“表面黑黄色，内部棕褐色”[1]。30 min时，石榴皮炭饮片部分已经炭化，且有灰化现象。35 min时，石榴皮炭饮片灰化程度严重。取各石榴皮炭样品，粉碎，过40目筛。
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2.2没食子酸和鞣花酸含量测定
2.2.1色谱条件Phenomenex hyperclone C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，0～8 min，1% A；8～32 min，1%～15% A；32～40 min，15% ～30%A。流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃。检测波长0～15 min，215 nm；15～40 min，255 nm。
2.2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，置25 mL量瓶中，加50%甲醇定容，制成每1 mL含100 μg的溶液，作为没食子酸对照品储备溶液。
精密称取鞣花酸对照品适量，置10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含400 μg的溶液，作为鞣花酸对照品储备溶液。
2.2.3供试品溶液的制备取石榴皮样品粉末(过40目筛)0.25 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声提取1 h，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
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2.2.4系统适应性试验考察分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 μL，注入液相色谱仪，测定。结果对照品色谱峰与其他峰均可达到基线分离。供试品色谱峰保留时间和峰形与对照品一致，因此该分析条件可行。对照品和供试品高效液相色谱见图1。
2.2.5线性关系考察没食子酸线性关系考察：取没食子酸对照品储备液，分别配置成质量浓度为5.0×10-3，1.5×10-2，3.02×10-2，4.5×10-2，6.0×10-2，7.6×10-2 g·L-1的系列标准溶液，在2.2.1项色谱条件分别进样2 μL，测定峰面积，以对照品进样质量浓度(g·L-1)为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=15 205X-0.911，r=0.999 9；没食子酸在5.0×10-3～7.6×10-2 g·L-1线性关系良好。
鞣花酸线性关系考察：取鞣花酸对照品储备液，分别配置成质量浓度为4.3×10-2，8.5×10-2，0.17，0.26，0.34，0.43 g·L-1的系列标准溶液，按2.2.1项色谱条件分别进样2 μL，测定峰面积，以对照品进样质量浓度(g·L-1)为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=19 576X-5.386，r=0.999 9；鞣花酸在0.043～0.43 g·L-1线性关系良好。
2.2.6精密度试验精密吸取供试品溶液2 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果没食子酸和鞣花酸峰面积的RSD分别为0.31%，0.70%，表明仪器精密度良好。, http://www.100md.com(周倩 戴衍朋 孙立立)
[关键词]石榴皮；炒炭；没食子酸；鞣花酸
石榴皮为石榴科植物石榴Punica granatum L.的干燥果皮，在我国药用历史悠久，具有涩肠止泻、止血、驱虫等功效[1]。在具体实践中，石榴皮须经过依法炮制，制成不同规格的饮片方能应用，目前应用最普遍的包括生品和石榴皮炭2种[2-4]。石榴皮生品长于驱虫、涩精、止带，多用于虫积腹痛、滑精、白带、脱肛、疥癣。石榴皮炭较生品收涩力增强，多用于久泻、久痢、崩漏[4]。在目前对石榴皮炭饮片炮制程度的判断仍然是靠外观性状，缺乏内在质量控制指标。石榴皮富含鞣质类成分，主要有没食子酸、鞣花酸、安石榴苷等成分[5]，且鞣质成分是影响石榴皮质量的主要因素[6-7]，曾有研究表明，加热炮制对石榴皮中没食子酸、鞣花酸和鞣质含量有显著影响[8]。为更好地控制饮片质量和石榴皮炭炮制程度，本实验通过研究建立了HPLC同时测定饮片中没食子酸和鞣花酸的含量，与传统的总鞣质含量测定方法相比，更加简便快捷。采用建立的含量测定方法对石榴皮生品和不同炮制程度的石榴皮炭进行了含量测定和比较，分析了没食子酸和鞣花酸的含量在炒炭过程中的变化规律。本研究可为控制石榴皮炭炮制程度提供有价值的内在质量控制指标。
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安捷伦Agilent 1200型液相色谱仪，G1315B检测器，1/10万电子天平(Sartorius R200D，德国)。LC-350A超声波中药处理机(济宁市中区鲁超仪器厂)。中药炮制控温炉(哈尔滨市测电器厂)。
试验用石榴皮饮片是市售饮片，产地山东，经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为石榴科植物石榴P. granatum L.的干燥果皮。没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号110831-200302)，鞣花酸对照品(Alfa Aesar，批号10149850)。乙腈为色谱纯，水为超纯水，甲醇、磷酸均为分析纯。
2方法与结果
2.1石榴皮炭样品的制备
取净石榴皮饮片150 g，置预热至400 ℃的中药炮制控温炉中，分别炒制一定时间(10，20，30，35 min)，制备成不同炮制程度的石榴皮炭饮片。炮制10 min的石榴皮炭饮片与传统要求相比较轻，未达到传统要求的炮制程度，20 min可达到传统炮制要求，即“表面黑黄色，内部棕褐色”[1]。30 min时，石榴皮炭饮片部分已经炭化，且有灰化现象。35 min时，石榴皮炭饮片灰化程度严重。取各石榴皮炭样品，粉碎，过40目筛。
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2.2没食子酸和鞣花酸含量测定
2.2.1色谱条件Phenomenex hyperclone C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱；以乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流动相，梯度洗脱，0～8 min，1% A；8～32 min，1%～15% A；32～40 min，15% ～30%A。流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃。检测波长0～15 min，215 nm；15～40 min，255 nm。
2.2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，置25 mL量瓶中，加50%甲醇定容，制成每1 mL含100 μg的溶液，作为没食子酸对照品储备溶液。
精密称取鞣花酸对照品适量，置10 mL量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含400 μg的溶液，作为鞣花酸对照品储备溶液。
2.2.3供试品溶液的制备取石榴皮样品粉末(过40目筛)0.25 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，称定质量，超声提取1 h，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。
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2.2.4系统适应性试验考察分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2 μL，注入液相色谱仪，测定。结果对照品色谱峰与其他峰均可达到基线分离。供试品色谱峰保留时间和峰形与对照品一致，因此该分析条件可行。对照品和供试品高效液相色谱见图1。
2.2.5线性关系考察没食子酸线性关系考察：取没食子酸对照品储备液，分别配置成质量浓度为5.0×10-3，1.5×10-2，3.02×10-2，4.5×10-2，6.0×10-2，7.6×10-2 g·L-1的系列标准溶液，在2.2.1项色谱条件分别进样2 μL，测定峰面积，以对照品进样质量浓度(g·L-1)为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=15 205X-0.911，r=0.999 9；没食子酸在5.0×10-3～7.6×10-2 g·L-1线性关系良好。
鞣花酸线性关系考察：取鞣花酸对照品储备液，分别配置成质量浓度为4.3×10-2，8.5×10-2，0.17，0.26，0.34，0.43 g·L-1的系列标准溶液，按2.2.1项色谱条件分别进样2 μL，测定峰面积，以对照品进样质量浓度(g·L-1)为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=19 576X-5.386，r=0.999 9；鞣花酸在0.043～0.43 g·L-1线性关系良好。
2.2.6精密度试验精密吸取供试品溶液2 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果没食子酸和鞣花酸峰面积的RSD分别为0.31%，0.70%，表明仪器精密度良好。, http://www.100md.com(周倩 戴衍朋 孙立立)