黄芪甲苷对Chang Liver细胞酒精性和非酒精性氧化损伤的保护作用(2)
2.4细胞内抗氧化酶活性及丙二醛含量的检测前处理同2.3项,培养结束后,胰酶消化,PBS洗2次,细胞沉淀重悬于冰冷的PBS中,冰水浴中超声破碎。按试剂盒说明书,测定T-AOC,细胞内CAT,SOD和 GSH-Px活性以及MDA含量。2.5细胞内活性氧水平的检测前处理同2.3项,培养结束后,弃上清,PBS洗2遍,加入含10 μmol·L-1 DCFH-DA的无血清RPMI-1640培养液,细胞培养箱中孵育30 min,每隔5 min轻摇混匀1 次,使探针与细胞充分接触。孵育结束后,弃培养液,用温暖PBS洗涤细胞3 次,去除未进入细胞内的DCFH-DA,荧光显微镜下随机选取不重复区域摄片。处理方法同上,装载探针后,胰酶消化并PBS重悬,流式细胞仪检测ROS含量(激发波长488 nm,发射波长525 nm)。
2.6流式细胞术检测细胞周期前处理同2.3项,培养结束后,胰酶消化,收集细胞沉淀,重悬于1 mL冰冷70%乙醇中,4 ℃过夜固定。次日取出,用冰冷的PBS洗细胞1 次 ......
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