远志寡糖酯类化合物及远志酮Ⅲ对CYP450酶的活性影响研究(2)
2.2孵育体系孵育体系(200 μL)包括磷酸二氢钾-氢氧化钾缓冲液(pH 7.4,100 mmol·L-1)、还原性辅酶Ⅱ(NADPH)产生体系(1 mmol·L-1 NADP+,10 mmol·L-1葡萄糖-6-磷酸,1 U·mL-1葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,40 mmol·L-1 MgCl2)、相应浓度的肝微粒体,和相应浓度的特异性探针底物(表1),远志提取物浓度为0~100 μmol·L-1不等。特异性探针底物预先溶于DMSO中,体系中有机溶剂占总体系的最终比例低于1%。在37 ℃预孵育5 min后,加入NADPH-产生体系起始反应。孵育相应时间(表1)后,加入冰乙腈(100 μL)终止反应。4 ℃下,2万 r·min-1离心10 min,取上清液适量,进样50 μL,通过HPLC测定代谢产物的生成量。所有样品平行测定2组。
2.3色谱条件
CYP1A2:检测波长 UV 245 nm,柱温 40 ℃,流动相乙腈-20 mmol·L-1磷酸二氢钾 (70∶30) ......
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