远志寡糖酯类化合物及远志酮Ⅲ对CYP450酶的活性影响研究(1)
[摘要]该研究采用人肝微粒体体外孵育的方法，通过特异性探针反应评价从远志中分离得到的寡糖酯类化合物tenuifoliside C， tenuifoliside D， telephiose A， telephiose C和远志酮Ⅲ对8个CYP450酶亚型的抑制作用。分别以非那西丁(CYP1A2)、香豆素(CYP2A6)、紫杉醇(CYP2C8)、双氯芬酸(CYP2C9)、右美沙芬(CYP2D6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A4)、S-美芬妥因(CYP2C19)作为评价CYP450酶活性的体外探针药物，以高效液相色谱法(HPLC)分别测定其代谢产物对乙酰氨基酚、7-羟基香豆素、6α-羟基紫杉醇、4′-羟基双氯芬酸、右啡烷、6-羟基氯唑沙宗、1′-羟基咪达唑仑、4′-羟基美芬妥因的生成量，评价5个单体化合物对CYP450酶活性的影响。 研究结果表明，4个寡糖酯类化合物和远志酮Ⅲ对CYP2E1有显著的抑制作用 (抑制率>50%)，对其他7个亚型CYP1A2，CYP2A6，CYP2C8，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP3A没有明显抑制作用。IC50分别为38.73，54.14，61.77，62.22，50.56 μmol·L-1。
, 百拇医药
[关键词]远志；细胞色素P450酶；人肝微粒体
细胞色素P450 酶(cytochrome P450，CYP450)参与内源性物质和包括药物在内的外源性物质的代谢。临床上有超过90%的药物都经过CYP450酶代谢[1]。很多药物由于影响CYP450酶的活性，使经该酶代谢的其他药物的药物代谢动力学发生改变，即导致临床上的药相互作用的发生。中药成分复杂，影响P450酶活性可能性更大，与药物联用会导致联用药物体内代谢过程的改变，影响其安全性和有效性。含远志的中药复方及其中成药在临床上广泛应用，多与安神益智、祛痰止咳类及心血管类药物联用[2]。
远志Polygala tenuifolia Willd.在抗痴呆、抗抑郁、抗心肌梗死、祛痰止咳、抗菌、抗癌、免疫增强、抑制乙醇吸收、抗炎、活血、止痛等方面具有广泛的药理活性[3]。其中的寡糖酯类成分与酮类化合物是远志中非常重要的2类化合物。研究表明，远志寡糖酯类成分及其他远志提取物具有抗痴呆和脑保护活性[4-5]，远志醇提物YZ-50(富含寡糖酯类)可显著改善抑郁症状[6-7]。远志中的酮类化合物具有利尿、抗菌、抗癌、抗抑郁等活性[8]。在2010年版的《中国药典》中，寡糖酯类化合物与远志酮Ⅲ的含量被用来作为中药远志含量测定的标准。刘春芳等[9]在给大鼠口服开心散后，在大鼠血清中检测到远志寡糖酯类化合物与远志酮Ⅲ及部分代谢产物，这些化合物可能会对CYP450酶的活性产生影响。
, 百拇医药
远志及其活性物质在体内、体外对CYP450酶活性影响的研究未见相关报道。本研究在体外选取远志中含量相对较高的4个寡糖酯类化合物tenuifoliside C， tenuifoliside D， telephiose A， telephiose C和远志酮Ⅲ，观察其对8种CYP亚型活性的影响，对具有抑制作用的亚型，进一步求算其抑制程度(IC50)，为进一步的体内实验与临床合理使用含有远志的药物提供科学依据，避免不良的药物相互作用。
1材料
Angilent 1200高效液相色谱仪(美国Angilent公司)，配有DAD二极管阵列检测器，FLD荧光检测其，四元梯度泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱。2万 r·min-1高速离心机(美国Sigma公司)，XS-105 1/10万电子天平(瑞士Mettler Toledo 公司)；超低温冰箱(中国海尔)，恒稳混匀仪(MS-100，杭州奥盛仪器有限公司)，MX-S涡旋仪(美国Scilogex公司)，C18色谱柱(4 mm×250 mm，5 μm； 美国Angilent公司)。
, 百拇医药
tenuifoliside C，tenuifoliside D，telephiose A，telephiose C，远志酮Ⅲ从远志中提取得到，纯度>98%。
人肝微粒体(上海瑞德公司)；非那西丁、香豆素、紫杉醇、双氯芬酸、右美沙芬、氯唑沙宗、咪达唑仑、S-美芬妥因、D-葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate；G-6-P)、还原型辅酶Ⅱ(β-nicotinamideadenine dinucleotide phosphate；NADPH)(美国Sigma公司)；磷酸二氢钾(国药集团化学试剂有限公司)；甲醇和乙腈均为色谱纯(美国赛默飞世尔科技公司)，其他试剂均为分析纯。
2方法
2.1溶液的配制
2.1.1供试药品溶液的配制分别称取远志中的5种提取物适量，溶于DMSO中，用磷酸盐缓冲液稀释tenuifoliside C至2，4，6，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释tenuifoliside D至4，6，8，10，12，14 mmol·L-1；稀释telephiose A至4，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释telephiose C至4，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释远志酮Ⅲ至2，4，6，8，10，12，14，16 mmol·L-1。放置4 ℃冰箱保存。
2.1.2探针药物与代谢产物溶液的配制精密称取探针药物若干，用DMSO溶解。使其在孵育体系的终浓度分别为非那西丁(40 μmol·L-1，CYP1A2)，香豆素(1 μmol·L-1，CYP2A6)，紫杉醇(10 μmol·L-1，CYP2C8)，双氯芬酸(10 μmol·L-1，CYP2C9)，右美沙芬(25 μmol·L-1，CYP2D6)，氯唑沙宗(120 μmol·L-1，CYP2E1)，咪达唑仑(3.5 μmol·L-1，CYP3A4)，S-美芬妥因(10 μmol·L-1， CYP2C19)。, 百拇医药(李照亮 董宪喆 王东晓 董瑞华 郭婷婷 孙艳 刘屏)
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[关键词]远志；细胞色素P450酶；人肝微粒体
细胞色素P450 酶(cytochrome P450，CYP450)参与内源性物质和包括药物在内的外源性物质的代谢。临床上有超过90%的药物都经过CYP450酶代谢[1]。很多药物由于影响CYP450酶的活性，使经该酶代谢的其他药物的药物代谢动力学发生改变，即导致临床上的药相互作用的发生。中药成分复杂，影响P450酶活性可能性更大，与药物联用会导致联用药物体内代谢过程的改变，影响其安全性和有效性。含远志的中药复方及其中成药在临床上广泛应用，多与安神益智、祛痰止咳类及心血管类药物联用[2]。
远志Polygala tenuifolia Willd.在抗痴呆、抗抑郁、抗心肌梗死、祛痰止咳、抗菌、抗癌、免疫增强、抑制乙醇吸收、抗炎、活血、止痛等方面具有广泛的药理活性[3]。其中的寡糖酯类成分与酮类化合物是远志中非常重要的2类化合物。研究表明，远志寡糖酯类成分及其他远志提取物具有抗痴呆和脑保护活性[4-5]，远志醇提物YZ-50(富含寡糖酯类)可显著改善抑郁症状[6-7]。远志中的酮类化合物具有利尿、抗菌、抗癌、抗抑郁等活性[8]。在2010年版的《中国药典》中，寡糖酯类化合物与远志酮Ⅲ的含量被用来作为中药远志含量测定的标准。刘春芳等[9]在给大鼠口服开心散后，在大鼠血清中检测到远志寡糖酯类化合物与远志酮Ⅲ及部分代谢产物，这些化合物可能会对CYP450酶的活性产生影响。
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远志及其活性物质在体内、体外对CYP450酶活性影响的研究未见相关报道。本研究在体外选取远志中含量相对较高的4个寡糖酯类化合物tenuifoliside C， tenuifoliside D， telephiose A， telephiose C和远志酮Ⅲ，观察其对8种CYP亚型活性的影响，对具有抑制作用的亚型，进一步求算其抑制程度(IC50)，为进一步的体内实验与临床合理使用含有远志的药物提供科学依据，避免不良的药物相互作用。
1材料
Angilent 1200高效液相色谱仪(美国Angilent公司)，配有DAD二极管阵列检测器，FLD荧光检测其，四元梯度泵，在线脱气机，自动进样器，柱温箱。2万 r·min-1高速离心机(美国Sigma公司)，XS-105 1/10万电子天平(瑞士Mettler Toledo 公司)；超低温冰箱(中国海尔)，恒稳混匀仪(MS-100，杭州奥盛仪器有限公司)，MX-S涡旋仪(美国Scilogex公司)，C18色谱柱(4 mm×250 mm，5 μm； 美国Angilent公司)。
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tenuifoliside C，tenuifoliside D，telephiose A，telephiose C，远志酮Ⅲ从远志中提取得到，纯度>98%。
人肝微粒体(上海瑞德公司)；非那西丁、香豆素、紫杉醇、双氯芬酸、右美沙芬、氯唑沙宗、咪达唑仑、S-美芬妥因、D-葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate；G-6-P)、还原型辅酶Ⅱ(β-nicotinamideadenine dinucleotide phosphate；NADPH)(美国Sigma公司)；磷酸二氢钾(国药集团化学试剂有限公司)；甲醇和乙腈均为色谱纯(美国赛默飞世尔科技公司)，其他试剂均为分析纯。
2方法
2.1溶液的配制
2.1.1供试药品溶液的配制分别称取远志中的5种提取物适量，溶于DMSO中，用磷酸盐缓冲液稀释tenuifoliside C至2，4，6，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释tenuifoliside D至4，6，8，10，12，14 mmol·L-1；稀释telephiose A至4，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释telephiose C至4，8，10，12，14，16 mmol·L-1；稀释远志酮Ⅲ至2，4，6，8，10，12，14，16 mmol·L-1。放置4 ℃冰箱保存。
2.1.2探针药物与代谢产物溶液的配制精密称取探针药物若干，用DMSO溶解。使其在孵育体系的终浓度分别为非那西丁(40 μmol·L-1，CYP1A2)，香豆素(1 μmol·L-1，CYP2A6)，紫杉醇(10 μmol·L-1，CYP2C8)，双氯芬酸(10 μmol·L-1，CYP2C9)，右美沙芬(25 μmol·L-1，CYP2D6)，氯唑沙宗(120 μmol·L-1，CYP2E1)，咪达唑仑(3.5 μmol·L-1，CYP3A4)，S-美芬妥因(10 μmol·L-1， CYP2C19)。, 百拇医药(李照亮 董宪喆 王东晓 董瑞华 郭婷婷 孙艳 刘屏)