中药生物药剂学分类系统的多成分溶出评价方法在葛根芩连片中的应用(1)
[摘要] 该研究是中药生物药剂学分类系统(biopharmaceutics classification system of Chinese materia medica，CMMBCS)用于中成药评价的实例，重点评估可能影响多成分吸收时序的溶出同步性问题。实验采用HPLC测定复方葛根芩连片中9种成分在不同溶出介质中不同时间点的累积溶出百分率，绘制体外溶出曲线，采用相似因子(f2)和聚类分析进行溶出曲线的相似性比较分析，结果表明在水介质中，峰7和峰8(黄芩苷)所代表的成分与2号参比峰(葛根素)相似性较差，相似因子均为43;在pH 7.4介质中，峰7和峰8(黄芩苷)所代表的成分与2号参比峰(葛根素)相似性较差，相似因子分别为31和45;其他介质中各峰所代表的成分与2号参比峰(葛根素)均相似性较好。该实验表明峰3，4，5和6(小檗碱)所代表的成分与2号参比峰(葛根素)具有完全同步溶出的特性;峰1和峰9所代表的成分与2号参比峰(葛根素)具有基本完全同步溶出的特性;峰7和峰8(黄芩苷)所代表的成分与2号参比峰(葛根素)不具有同步溶出的特性。
, 百拇医药
[关键词] 葛根芩连片;溶出度;相似因子;聚类分析
[收稿日期] 2014-07-18
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81473362);北京中医药大学创新团队发展计划项目(2011-CXTD-13)
[通信作者] *董玲，副研究员，硕士生导师，主要从事新剂型给药系统研究，Tel：(010)64286245，E-mail：dongling@bucm.edu.cn;*刘洋，副教授，硕士生导师，主要从事药物代谢研究，Tel：(010)84738629，E-mail：liuyang@bucm.edu.cn
[作者简介] 隗丽，硕士研究生，E-mail：yuli0103@163.com
多成分多靶点的中药特点已经成为学术界共识[1]，中药复方的作用与复方中有效成分的含量和配比关系密切。而固体制剂中药物发挥治疗作用需要经过药物溶出和吸收2个关键步骤。因此，在研制中药复方释药系统中，使两者处于良好的匹配状态，才能确保中药各组分不仅能吸收完全，而且可以确保中药复方各组分按照比例吸收[2]。中药生物药剂学分类系统设立的主要目的是在药物发现阶段(discovery)对中药多成分整体的生物药剂学特征评价，并为下一步的药物开发阶段(development)提供剂型选择支持和成药性保障，主要利用溶解性和渗透性作为科学框架的分类依据。对已上市中成药的评价，CMMBCS也能起到积极作用，此时更适合于采用溶出度评价方法，结合中药多成分的特点，建立符合中药特色的溶出评价体系。因此，本研究采用中医经典《伤寒论》[3]中葛根芩连汤的现代制剂葛根芩连片，探索其多成分环境下的主要成分溶出规律及特点，重点考察可能影响成分吸收时序的多成分溶出同步性问题。
, 百拇医药
1 材料
1.1 仪器
Waters液相色谱系统(600四元泵，美国Waters公司)，2487双波长紫外检测器，Empower2工作站;电子分析天平(BT-25S，北京赛多利斯仪器有限公司);pH酸度计(FE20，梅特勒-托利多仪器上海有限公司);智能溶出仪(ZRS-8G，天津天大天发有限责任公司)。
1.2 药物
葛根素对照品(批号110752-200912)，黄芩苷对照品(批号110715-201117)，盐酸小檗碱对照品(批号110713-200911)均购买于中国食品药品检定研究院。葛根芩连片(陕西利君现代中药有限公司，批号110201005，规格0.3 g)。
1.3 试剂
, 百拇医药
甲醇(色谱级)购买于Fisher公司(美国);娃哈哈纯净水购买于娃哈哈集团公司(中国杭州)。三乙胺、盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠、一水枸橼酸、磷酸氢二钠等试剂(均购自北京化工厂)都为分析纯。
2 方法
2.1 溶液制备
2.1.1 对照溶液配置 取装量差异项下的片剂，除去包衣，研细，精密称取适量(约相当于1片的平均质量)，加适量甲醇使溶解，加溶出介质制成每1 mL中约含0.6 mg药物的溶液，作为对照溶液。
2.1.2 溶出介质配制 pH 1.0盐酸溶液配制：量取盐酸溶液9 mL，加水稀释至1 000 mL，即得;pH 4.0缓冲液配制：取一水枸橼酸12.90 g，取磷酸氢二钠27.25 g，加水1 000 mL溶解，即得;pH 6.8缓冲液配制：取磷酸二氢钾1.70 g和磷酸氢二钾1.78 g，加水溶解稀释至1 000 mL，即得;pH 7.4缓冲液配制：取磷酸二氢钾6.81 g，加0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液395 mL稀释至1 000 mL，即得。
, 百拇医药
2.2 溶出度试验条件
采用《中国药典》2010年版溶出方法及模拟人体消化道体内环境的5种溶剂分别测定。具体操作如下：取本品，照溶出度测定法(药典2010年版二部附录XC)[4]，方法为桨法，转速为100 r·min-1;溶出介质为模拟人体生理环境的5种pH溶液;取样20 mL，并及时补液，取出的溶液置于蒸发皿中挥干，再用1 mL纯净水溶解，过0.45 μm微孔滤膜，即得供试样品;取样时间为5，10，15，30，45，60 min。
2.3 溶出度测定方法
采用高效液相色谱法测定，根据相关参考文献[5]，色谱条件为：Thermo Scientific，Hypersil C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm);流速1.0 mL·min-1;检测波长270 nm;柱温室温;进样量10 μL;流动相：流动相A为缓冲溶液(1%三乙胺，1%乙酸，用磷酸调pH到3.0)，B为甲醇，梯度洗脱程序为：0～12 min，24%B;12～13 min，24%～28%B;13～19 min，28%B;19～20 min，28%～33.8%B;20～37.5 min，33.8%B;37.5～38.5 min，33.8%～41%B;38.5～60 min，41%～75%B。, http://www.100md.com(隗丽 汪国鹏 董玲 唐明敏 张雷 朱美玲 刘洋)
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[关键词] 葛根芩连片;溶出度;相似因子;聚类分析
[收稿日期] 2014-07-18
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81473362);北京中医药大学创新团队发展计划项目(2011-CXTD-13)
[通信作者] *董玲，副研究员，硕士生导师，主要从事新剂型给药系统研究，Tel：(010)64286245，E-mail：dongling@bucm.edu.cn;*刘洋，副教授，硕士生导师，主要从事药物代谢研究，Tel：(010)84738629，E-mail：liuyang@bucm.edu.cn
[作者简介] 隗丽，硕士研究生，E-mail：yuli0103@163.com
多成分多靶点的中药特点已经成为学术界共识[1]，中药复方的作用与复方中有效成分的含量和配比关系密切。而固体制剂中药物发挥治疗作用需要经过药物溶出和吸收2个关键步骤。因此，在研制中药复方释药系统中，使两者处于良好的匹配状态，才能确保中药各组分不仅能吸收完全，而且可以确保中药复方各组分按照比例吸收[2]。中药生物药剂学分类系统设立的主要目的是在药物发现阶段(discovery)对中药多成分整体的生物药剂学特征评价，并为下一步的药物开发阶段(development)提供剂型选择支持和成药性保障，主要利用溶解性和渗透性作为科学框架的分类依据。对已上市中成药的评价，CMMBCS也能起到积极作用，此时更适合于采用溶出度评价方法，结合中药多成分的特点，建立符合中药特色的溶出评价体系。因此，本研究采用中医经典《伤寒论》[3]中葛根芩连汤的现代制剂葛根芩连片，探索其多成分环境下的主要成分溶出规律及特点，重点考察可能影响成分吸收时序的多成分溶出同步性问题。
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1 材料
1.1 仪器
Waters液相色谱系统(600四元泵，美国Waters公司)，2487双波长紫外检测器，Empower2工作站;电子分析天平(BT-25S，北京赛多利斯仪器有限公司);pH酸度计(FE20，梅特勒-托利多仪器上海有限公司);智能溶出仪(ZRS-8G，天津天大天发有限责任公司)。
1.2 药物
葛根素对照品(批号110752-200912)，黄芩苷对照品(批号110715-201117)，盐酸小檗碱对照品(批号110713-200911)均购买于中国食品药品检定研究院。葛根芩连片(陕西利君现代中药有限公司，批号110201005，规格0.3 g)。
1.3 试剂
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甲醇(色谱级)购买于Fisher公司(美国);娃哈哈纯净水购买于娃哈哈集团公司(中国杭州)。三乙胺、盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠、一水枸橼酸、磷酸氢二钠等试剂(均购自北京化工厂)都为分析纯。
2 方法
2.1 溶液制备
2.1.1 对照溶液配置 取装量差异项下的片剂，除去包衣，研细，精密称取适量(约相当于1片的平均质量)，加适量甲醇使溶解，加溶出介质制成每1 mL中约含0.6 mg药物的溶液，作为对照溶液。
2.1.2 溶出介质配制 pH 1.0盐酸溶液配制：量取盐酸溶液9 mL，加水稀释至1 000 mL，即得;pH 4.0缓冲液配制：取一水枸橼酸12.90 g，取磷酸氢二钠27.25 g，加水1 000 mL溶解，即得;pH 6.8缓冲液配制：取磷酸二氢钾1.70 g和磷酸氢二钾1.78 g，加水溶解稀释至1 000 mL，即得;pH 7.4缓冲液配制：取磷酸二氢钾6.81 g，加0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液395 mL稀释至1 000 mL，即得。
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2.2 溶出度试验条件
采用《中国药典》2010年版溶出方法及模拟人体消化道体内环境的5种溶剂分别测定。具体操作如下：取本品，照溶出度测定法(药典2010年版二部附录XC)[4]，方法为桨法，转速为100 r·min-1;溶出介质为模拟人体生理环境的5种pH溶液;取样20 mL，并及时补液，取出的溶液置于蒸发皿中挥干，再用1 mL纯净水溶解，过0.45 μm微孔滤膜，即得供试样品;取样时间为5，10，15，30，45，60 min。
2.3 溶出度测定方法
采用高效液相色谱法测定，根据相关参考文献[5]，色谱条件为：Thermo Scientific，Hypersil C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm，5 μm);流速1.0 mL·min-1;检测波长270 nm;柱温室温;进样量10 μL;流动相：流动相A为缓冲溶液(1%三乙胺，1%乙酸，用磷酸调pH到3.0)，B为甲醇，梯度洗脱程序为：0～12 min，24%B;12～13 min，24%～28%B;13～19 min，28%B;19～20 min，28%～33.8%B;20～37.5 min，33.8%B;37.5～38.5 min，33.8%～41%B;38.5～60 min，41%～75%B。, http://www.100md.com(隗丽 汪国鹏 董玲 唐明敏 张雷 朱美玲 刘洋)