新疆紫草PAL，HMGR，PGT基因的过表达和RNA干扰载体的构建(2)
2.8.1 BP连接反应 使用Invitrogen公司pENTRTM SD/D-TOPO Vector做入门载体连接高保真PCR产物。在微量离心管中配制BP反应混合液(3 μL体系)：1.5 μL ddH2O，0.5 μL 高保真PCR产物，0.5 μL salt solution，0.5 μL 入门载体。22 ℃水浴3 h，转入DH5α，LB平板(卡那霉素，Kana抗性)培养过夜，筛选菌落并菌液PCR验证。1%琼脂糖凝胶电泳检测并测序。2.8.2 LR连接反应 选择BP反应测序成功的质粒，进行LR反应。使用Invitrogen公司LR Clonase Ⅱ enzyme mix介导目的基因从入门载体的连接到入门载体。过表达载体为pH7WG2D ......
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