18份草珊瑚种质的ISSR标记遗传相关性与亲本选配分析(2)
2.2 多态性ISSR 引物筛选及参试材料的ISSR 分析 以18个样品的基因组DNA为模板, 对100条ISSR引物(UBC801~UBC900,购自上海生工生物技术有限公司)进行多态性筛选。在冰上建立20 μL的ISSR-PCR 反应体系:50 ng模板DNA,0.2 mmol·L-1 dNTPs,2.5mmol·L-1Mg2+,1.0 U Taq DNA 聚合酶、0.4 μmol·L-1引物。ISSR-PCR 扩增程序为94 ℃预变性5 min; 94 ℃ 45 s, 31~50 ℃ 1.5 min, 72 ℃ 1.5 min, 35 个循环; 72 ℃ 10 min; 10 ℃保存。退火温度因扩增产物的效果而调整。PCR 产物经1.8%的琼脂糖凝胶电泳分离, EB 染色检测。然后对18份草珊瑚样品进行标记分析 ......
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