《中国药典》二氧化硫测定法应用于白芍药材检测的探讨(1)
[摘要] 为了探讨2010年版《中国药典》第一增补本附录二氧化硫(SO2)残留量测定法应用于白芍药材检测的可靠性，采用药典方法测定白芍药材中SO2残留量，考察方法的重复性;采用HPLC测定白芍残渣和蒸馏液中芍药苷亚硫酸酯的含量，考察芍药苷亚硫酸酯被盐酸置换转化释放SO2的情况。研究发现药典方法检测白芍药材SO2残留量时，结果重复性差;SO2残留检测达“终点”时，药材残渣和蒸馏液中均检测到芍药苷亚硫酸酯，说明芍药苷亚硫酸酯没有完全被盐酸置换成亚硫酸释放SO2。药典方法不能准确检测白芍药材SO2残留量，有必要进行修订或建立新的高选择性检测方法。
[关键词] 二氧化硫残留;白芍;HPLC;芍药苷亚硫酸酯
[收稿日期] 2014-07-25
[基金项目] 国家中医药管理局行业专项(201307008-2);国家高技术研究发展计划(863)项目(2014AA022204);中国中医科学院江苏分院课题(JSBN1301)
, http://www.100md.com
[通信作者] *李松林，研究员，硕士生导师，主要从事中药药效物质基础、质量控制和新产品研发，Tel：(025)85639640，E-mail：songlinli64@126.com
[作者简介] 刘欢欢，硕士研究生，Tel： 18351895085，E-mail：huanhuanliuyc@126.com
硫熏法是部分中药材传统加工养护方法之一，具有防虫、防霉、杀菌和美化药材外观的作用[1]。因经济、方便，在民间被广泛应用，近年来甚至被滥用[2]。研究表明不合理的硫熏处理可导致药材活性成分发生转化[3-4]，SO2(亚硫酸盐)残留量过高，不但影响药材质量，而且存在安全隐患[5-7]。为了监控药材硫熏情况，2010年版《中国药典》附录收载了中药材及饮片中SO2残留量测定方法[8]，并在第一增补本对方法进行修订[9]。其基本原理是将样品在充满氮气的环境中经盐酸酸化，使残留亚硫酸盐被置换生成亚硫酸，亚硫酸再经加热水解生成SO2，产生的SO2通过氮气流直接带入吸收液中，再运用碘和亚硫酸氧化还原反应进行滴定[8-9]。在2010年版《中国药典》第二增补本中又收载了中药材及饮片中SO2残留限量标准，规定山药、牛膝、粉葛、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白术和党参等10种中药材及其饮片SO2残留量不得超过400 mg·kg-1，其他中药材及饮片则不得超过150 mg·kg-1[10]。
, 百拇医药
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall的干燥根，为常用中药材，在储存过程中容易发生色变和虫蛀等现象，通常采用硫熏法进行加工处理[11]。但研究发现硫熏后白芍中主要活性成分芍药苷会明显降低，同时生成新的化合物芍药苷亚硫酸酯[12-14]。尽管初步研究证明芍药苷亚硫酸酯无明显毒性[15]，但其活性和体内药代动力学行为均与芍药苷有明显差异[16-17]。本课题组按照《中国药典》2010年版第一增补本附录IXU项下的蒸馏法检测白芍药材中的SO2含量[9]，发现实验结果重复性差。因此本文拟通过考察药典方法测定白芍中SO2残留结果的重复性，应用HPLC测定药材残渣和蒸馏液中芍药苷亚硫酸酯的含量，探讨药典方法测定白芍中SO2残留量的可靠性，为药典方法的修订提供科学依据。
1 材料
Waters高效液相色谱仪(Alliance2695四元泵、自动进样系统、柱温箱、Empower 色谱工作站、Waters2996二极管阵列检测器);Millipore Milli-Q 超纯水制备仪(美国);METTLER 1/1万和1/100万电子天平(瑞士);KQ-250E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);1 000 mL可调温电热套(南通市通州申通电热器厂);78-1型磁力加热搅拌器(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);二氧化硫残留测定装置(泰康医疗);氮气(纯度≥99.999%，南京天泽气体有限责任公司)。
, 百拇医药
白芍样品(JSPACM-K-1-27， JSPACM-K-1-17，JSPACM-K-1-15)购自亳州康美药材交易中心，芍药苷亚硫酸酯(paeoniflorin sulfonate)对照品 (实验室自制，结构经NMR和MS确证，纯度经HPLC分析≥98%)。硫代硫酸钠滴定液、碘滴定液(0.01 mol·L-1，按2010年版《中国药典》第一增补版附录XV F 方法配制)[9];淀粉指示液(按2010年版《中国药典》二部附录XV E方法配制)[18];水为超纯水;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 二氧化硫残留量测定
按照《中国药典》2010年版第一增补版附录IXU中规定用蒸馏法测定药材或饮片中的亚硫酸盐(以SO2计)的残留量。加热两颈圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸不同时间后开始用碘滴定液(0.01 mol·L-1)滴定，至蓝色或蓝紫色持续30 s或2 min不完全消褪，并将滴定结果用空白试验校正。每1 mL碘滴定液(0.01 mol·L-1)相当于0.640 6 mg的SO2。
, 百拇医药
2.2 芍药苷亚硫酸酯的含量测定
应用本课题组前期建立的HPLC方法测定白芍药材(残渣)和蒸馏液中芍药苷和芍药苷亚硫酸酯的含量[19]。
白芍药材(残渣)样品的制备：取药材粉末约1 g，残渣粉末约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入70%甲醇25，2.5 mL，密塞。超声处理(100 W， 45 kHz) 45 min，超声水温保持一定温度[(30±1) ℃]，放冷，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。
白芍蒸馏液样品的制备：取蒸馏液，放冷，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。
3 结果与讨论, http://www.100md.com(刘欢欢 孔铭 李秀杨 李松林)
[关键词] 二氧化硫残留;白芍;HPLC;芍药苷亚硫酸酯
[收稿日期] 2014-07-25
[基金项目] 国家中医药管理局行业专项(201307008-2);国家高技术研究发展计划(863)项目(2014AA022204);中国中医科学院江苏分院课题(JSBN1301)
, http://www.100md.com
[通信作者] *李松林，研究员，硕士生导师，主要从事中药药效物质基础、质量控制和新产品研发，Tel：(025)85639640，E-mail：songlinli64@126.com
[作者简介] 刘欢欢，硕士研究生，Tel： 18351895085，E-mail：huanhuanliuyc@126.com
硫熏法是部分中药材传统加工养护方法之一，具有防虫、防霉、杀菌和美化药材外观的作用[1]。因经济、方便，在民间被广泛应用，近年来甚至被滥用[2]。研究表明不合理的硫熏处理可导致药材活性成分发生转化[3-4]，SO2(亚硫酸盐)残留量过高，不但影响药材质量，而且存在安全隐患[5-7]。为了监控药材硫熏情况，2010年版《中国药典》附录收载了中药材及饮片中SO2残留量测定方法[8]，并在第一增补本对方法进行修订[9]。其基本原理是将样品在充满氮气的环境中经盐酸酸化，使残留亚硫酸盐被置换生成亚硫酸，亚硫酸再经加热水解生成SO2，产生的SO2通过氮气流直接带入吸收液中，再运用碘和亚硫酸氧化还原反应进行滴定[8-9]。在2010年版《中国药典》第二增补本中又收载了中药材及饮片中SO2残留限量标准，规定山药、牛膝、粉葛、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白术和党参等10种中药材及其饮片SO2残留量不得超过400 mg·kg-1，其他中药材及饮片则不得超过150 mg·kg-1[10]。
, 百拇医药
白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall的干燥根，为常用中药材，在储存过程中容易发生色变和虫蛀等现象，通常采用硫熏法进行加工处理[11]。但研究发现硫熏后白芍中主要活性成分芍药苷会明显降低，同时生成新的化合物芍药苷亚硫酸酯[12-14]。尽管初步研究证明芍药苷亚硫酸酯无明显毒性[15]，但其活性和体内药代动力学行为均与芍药苷有明显差异[16-17]。本课题组按照《中国药典》2010年版第一增补本附录IXU项下的蒸馏法检测白芍药材中的SO2含量[9]，发现实验结果重复性差。因此本文拟通过考察药典方法测定白芍中SO2残留结果的重复性，应用HPLC测定药材残渣和蒸馏液中芍药苷亚硫酸酯的含量，探讨药典方法测定白芍中SO2残留量的可靠性，为药典方法的修订提供科学依据。
1 材料
Waters高效液相色谱仪(Alliance2695四元泵、自动进样系统、柱温箱、Empower 色谱工作站、Waters2996二极管阵列检测器);Millipore Milli-Q 超纯水制备仪(美国);METTLER 1/1万和1/100万电子天平(瑞士);KQ-250E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);1 000 mL可调温电热套(南通市通州申通电热器厂);78-1型磁力加热搅拌器(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);二氧化硫残留测定装置(泰康医疗);氮气(纯度≥99.999%，南京天泽气体有限责任公司)。
, 百拇医药
白芍样品(JSPACM-K-1-27， JSPACM-K-1-17，JSPACM-K-1-15)购自亳州康美药材交易中心，芍药苷亚硫酸酯(paeoniflorin sulfonate)对照品 (实验室自制，结构经NMR和MS确证，纯度经HPLC分析≥98%)。硫代硫酸钠滴定液、碘滴定液(0.01 mol·L-1，按2010年版《中国药典》第一增补版附录XV F 方法配制)[9];淀粉指示液(按2010年版《中国药典》二部附录XV E方法配制)[18];水为超纯水;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 二氧化硫残留量测定
按照《中国药典》2010年版第一增补版附录IXU中规定用蒸馏法测定药材或饮片中的亚硫酸盐(以SO2计)的残留量。加热两颈圆底烧瓶内的溶液至沸，并保持微沸不同时间后开始用碘滴定液(0.01 mol·L-1)滴定，至蓝色或蓝紫色持续30 s或2 min不完全消褪，并将滴定结果用空白试验校正。每1 mL碘滴定液(0.01 mol·L-1)相当于0.640 6 mg的SO2。
, 百拇医药
2.2 芍药苷亚硫酸酯的含量测定
应用本课题组前期建立的HPLC方法测定白芍药材(残渣)和蒸馏液中芍药苷和芍药苷亚硫酸酯的含量[19]。
白芍药材(残渣)样品的制备：取药材粉末约1 g，残渣粉末约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入70%甲醇25，2.5 mL，密塞。超声处理(100 W， 45 kHz) 45 min，超声水温保持一定温度[(30±1) ℃]，放冷，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。
白芍蒸馏液样品的制备：取蒸馏液，放冷，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，即得。
3 结果与讨论, http://www.100md.com(刘欢欢 孔铭 李秀杨 李松林)