六味地黄软胶囊HPLC指纹图谱研究(1)
[摘要] 建立六味地黄软胶囊的HPLC指纹图谱，为六味地黄软胶囊质量控制提供参考。采用HPLC，Agilent C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-0.02%三氟乙酸为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃;检测波长0～60 min，238 nm;60～70 min，210 nm，对不同批次六味地黄软胶囊的指纹图谱进行测定，采用中药指纹图谱相似度评价系统(2004A版)软件分析，以马钱苷为参照峰，从中选择了16个分离较好的共有峰，并根据共有峰对12批样品进行聚类分析(HCA)和相似度分析(SA)。聚类分析将12批样品划分为2类，其中7号为第一类，其他均为第二类;相似度结果表明，12批六味地黄软胶囊指纹图谱与共有模式之间相似性良好，相似度均大于0.92，SA分析结果与HCA分析结果基本一致。该方法简便易行，有较好的精密度、重复性及稳定性，可以作为六味地黄软胶囊质量的评价方法。
[关键词] 六味地黄软胶囊;高效液相色谱法;系统聚类分析;指纹图谱
, 百拇医药
[收稿日期] 2014-09-09
[通信作者] *萧伟，博士生导师，Tel： (0518)81152337，E-mail： wzhzh-nj@163.net
[作者简介] 石伟，硕士研究生，Tel：18888130365，E-mail： swv2012@163.com
六味地黄方出自宋代《小儿药证直觉》，系由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、泽泻、茯苓6味药材按8∶4∶3∶4∶3∶3配伍而成。本方组方严谨，三补三泻，滋补而不留邪，降泄而不伤正，是中医十大名方之一[1]。
目前，市售六味地黄制剂的剂型包括丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液等，其中软胶囊是继传统剂型之后发展的一种较新剂型，具有掩盖药物的不良气味、延缓药品氧化或者吸潮、提高生物利用度等优点[2]。近年来，六味地黄制剂质量控制方法研究主要体现在多成分含量测定[3-5]、指纹图谱[6]、溶出度[7]等方面。《中国药典》2010年版规定六味地黄软胶囊的含量测定指标为酒萸肉中的马钱苷、牡丹皮中的丹皮酚[8]，对成分复杂的六味地黄软胶囊，不能全面反映其质量。
, 百拇医药
本研究采用HPLC对12批六味地黄软胶囊样品进行了较为全面的指纹图谱研究，对其中7个共有峰进行了指认。并采用聚类分析和相似度评价对实验结果进行了统计，两者结果均表明，该产品各批次之间差异较小。本方法操作简便，重复性高、稳定性较好，可以为六味地黄软胶囊质量标准提升提供参考。
1 材料
岛津高效液相色谱仪(日本岛津公司); XP6电子天平(METTLER TOLEDO);BP211D型电子分析天平(METTLER TOLEDO)。
没食子酸(批号110831-200803，纯度90.1%);5-羟甲基糠醛(批号110626-201308);马钱苷对照品(批号110640-201005，纯度99.2%);芍药苷(批号110736-201136，纯度94.9%);丹皮酚(批号110708-200506);熊果酸(批号110742-201220，纯度99.3%)均来源于中国食品药品检定研究院;莫诺苷(由军事医学科学院从山茱萸药材中分离得到，经1H-，13C-NMR进行结构鉴定，HPLC峰面积归一化法分析测得纯度为95.7%)。乙腈(色谱纯);水为纯化水，其余均为分析纯。
, 百拇医药
六味地黄软胶囊(S1，批号120205;S2，批号120206 ;S3，批号120907;S4，批号121005;S5，批号121006;S6，批号121007;S7，批号121008;S8，批号121009;S9，批号121010;S10，批号121012;S11，批号121210;S12，批号130101)来源于江苏康缘药业股份有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相乙腈(A)-0.02% 三氟乙酸(B)，梯度洗脱，0～5 min，4% A;5～30 min，4%～16% A;30～40 min，16% A;40～55 min，16%～92% A;55～70 min，92%～95% A。流速1.0 mL·min-1 ;柱温30 ℃;检测波长：0～60 min，238 nm;60～70 min，210 nm。
, 百拇医药
2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚、熊果酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇分别制成每1 mL含没食子酸24.036 μg，5-羟甲基糠醛 4.120 μg，莫诺苷37.068 μg，马钱苷39.024 μg，芍药苷13.284 μg，丹皮酚46.845 μg，熊果酸25.104 μg的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取软胶囊样品内容物10粒混匀，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，回流处理(70 ℃)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 精密度试验 取同一供试品(S1，批号120205)，按2.3项下的方法，制备供试品溶液。然后按2.1项下色谱条件，进样，测定，连续6次。测得其各共有峰的相对保留时间RSD均<2%，相对峰面积RSD<5%，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验 取同一供试品(S1，批号120205)，按2.3项下的方法，制备供试品溶液。分别于制备后0，2，6，4，8，10，12，24 h分别进样，按2.1项下色谱条件测定，其各共有峰的相对保留时间RSD均<2%，相对峰面积RSD<5%，结果表明供试品溶液放置24 h稳定。, 百拇医药(石伟 李家春 杨素德 李云 靳瑞婷 孙仙玲 王振中 毕宇安 萧伟)
[关键词] 六味地黄软胶囊;高效液相色谱法;系统聚类分析;指纹图谱
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[收稿日期] 2014-09-09
[通信作者] *萧伟，博士生导师，Tel： (0518)81152337，E-mail： wzhzh-nj@163.net
[作者简介] 石伟，硕士研究生，Tel：18888130365，E-mail： swv2012@163.com
六味地黄方出自宋代《小儿药证直觉》，系由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、泽泻、茯苓6味药材按8∶4∶3∶4∶3∶3配伍而成。本方组方严谨，三补三泻，滋补而不留邪，降泄而不伤正，是中医十大名方之一[1]。
目前，市售六味地黄制剂的剂型包括丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液等，其中软胶囊是继传统剂型之后发展的一种较新剂型，具有掩盖药物的不良气味、延缓药品氧化或者吸潮、提高生物利用度等优点[2]。近年来，六味地黄制剂质量控制方法研究主要体现在多成分含量测定[3-5]、指纹图谱[6]、溶出度[7]等方面。《中国药典》2010年版规定六味地黄软胶囊的含量测定指标为酒萸肉中的马钱苷、牡丹皮中的丹皮酚[8]，对成分复杂的六味地黄软胶囊，不能全面反映其质量。
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本研究采用HPLC对12批六味地黄软胶囊样品进行了较为全面的指纹图谱研究，对其中7个共有峰进行了指认。并采用聚类分析和相似度评价对实验结果进行了统计，两者结果均表明，该产品各批次之间差异较小。本方法操作简便，重复性高、稳定性较好，可以为六味地黄软胶囊质量标准提升提供参考。
1 材料
岛津高效液相色谱仪(日本岛津公司); XP6电子天平(METTLER TOLEDO);BP211D型电子分析天平(METTLER TOLEDO)。
没食子酸(批号110831-200803，纯度90.1%);5-羟甲基糠醛(批号110626-201308);马钱苷对照品(批号110640-201005，纯度99.2%);芍药苷(批号110736-201136，纯度94.9%);丹皮酚(批号110708-200506);熊果酸(批号110742-201220，纯度99.3%)均来源于中国食品药品检定研究院;莫诺苷(由军事医学科学院从山茱萸药材中分离得到，经1H-，13C-NMR进行结构鉴定，HPLC峰面积归一化法分析测得纯度为95.7%)。乙腈(色谱纯);水为纯化水，其余均为分析纯。
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六味地黄软胶囊(S1，批号120205;S2，批号120206 ;S3，批号120907;S4，批号121005;S5，批号121006;S6，批号121007;S7，批号121008;S8，批号121009;S9，批号121010;S10，批号121012;S11，批号121210;S12，批号130101)来源于江苏康缘药业股份有限公司。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相乙腈(A)-0.02% 三氟乙酸(B)，梯度洗脱，0～5 min，4% A;5～30 min，4%～16% A;30～40 min，16% A;40～55 min，16%～92% A;55～70 min，92%～95% A。流速1.0 mL·min-1 ;柱温30 ℃;检测波长：0～60 min，238 nm;60～70 min，210 nm。
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2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚、熊果酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇分别制成每1 mL含没食子酸24.036 μg，5-羟甲基糠醛 4.120 μg，莫诺苷37.068 μg，马钱苷39.024 μg，芍药苷13.284 μg，丹皮酚46.845 μg，熊果酸25.104 μg的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 取软胶囊样品内容物10粒混匀，取约0.4 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，回流处理(70 ℃)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 精密度试验 取同一供试品(S1，批号120205)，按2.3项下的方法，制备供试品溶液。然后按2.1项下色谱条件，进样，测定，连续6次。测得其各共有峰的相对保留时间RSD均<2%，相对峰面积RSD<5%，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验 取同一供试品(S1，批号120205)，按2.3项下的方法，制备供试品溶液。分别于制备后0，2，6，4，8，10，12，24 h分别进样，按2.1项下色谱条件测定，其各共有峰的相对保留时间RSD均<2%，相对峰面积RSD<5%，结果表明供试品溶液放置24 h稳定。, 百拇医药(石伟 李家春 杨素德 李云 靳瑞婷 孙仙玲 王振中 毕宇安 萧伟)