UPLC用于热毒宁注射液中11种成分测定及其指纹图谱研究(1)
[摘要] 该文建立超高效液相色谱法(UPLC)同时测定热毒宁注射液中新绿原酸，绿原酸，隐绿原酸，异绿原酸B，异绿原酸A，异绿原酸C，山栀苷，京尼平苷酸，京尼平龙胆双糖苷，栀子苷和断氧化马钱子苷共11种有效成分含量，并建立热毒宁注射液UPLC指纹图谱，用于热毒宁注射液质量控制。该方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm， 1.8 μm)，预柱为Agilent UPLC Guard ZORBAX SB-C18(3.0 mm×5 mm)，流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱;流速0.4 mL·min-1，进样量2 μL，柱温30 ℃，检测波长324，238 nm用于含量测定，225 nm用于指纹图谱。结果显示新绿原酸，绿原酸，隐绿原酸，异绿原酸B，异绿原酸A，异绿原酸C，山栀苷，京尼平苷酸，京尼平龙胆双糖苷，栀子苷和断氧化马钱子苷11个被测组分达到基线分离;在线性范围内具有良好的线性关系，相关系数均大于0.999;平均回收率分别为103.5%，100.2%，103.3%，102.8%，101.3%，102.8%，97.36%，99.62%，98.16%，102.8%，99.27%。对45批热毒宁注射液进行UPLC指纹图谱研究，以其中的30批生成对照指纹图谱，计算余下15批热毒宁注射液与对照指纹图谱的相似度，相似度值均大于0.99。该方法快速准确灵敏，可为热毒宁注射液多成分含量测定和指纹图谱质量控制提供参考。
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[关键词] 超高效液相色谱法; 热毒宁注射液; 多成分含量测定; 指纹图谱; 质量控制
[收稿日期] 2014-09-08
[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402203)
[通信作者] 萧伟，博士，研究员级高级工程师，研究方向为中药新药的研究与开发，Tel： (0518)85522009，E-mail： wzhzh-nj@163.net
[作者简介] 吴莎，博士研究生，Tel：13675292285，E-mail：wusha729@163.com
热毒宁注射液由金银花、青蒿、栀子组成，具有清热、疏风、解毒功效，临床上用于治疗上呼吸道感染[1]。热毒宁注射液成分研究表明，其主要含有有机酸类和环烯醚萜类化合物[2-3]。前期研究建立了热毒宁注射液HPLC指纹图谱[4]和一测多评法测定热毒宁注射液中的9种成分[5]，上述方法运行时间较长， 针对处方中栀子药材只选择栀子苷作为控制指标较为局限。栀子中富含环烯醚萜类化合物[6-7]，有研究报道同时测定栀子药材中多种环烯醚萜苷类成分含量[8-10]，及有机酸、环烯醚萜苷和色素3类成分含量[11]。超高效液相色谱(UPLC)技术可以大大缩短分析时间，提高分析的灵敏度和分辨率，在中药注射液质量控制方面有较为广泛地应用[12-15]。因此，本研究建立了一种超高效液相色谱方法，同时测定热毒宁注射液中11种成分含量(包括6种有机酸类化合物和5种环烯醚萜类化合物)，并建立热毒宁注射液指纹图谱。该方法简单快捷灵敏，可为热毒宁注射液质量标准提升提供参考。
, 百拇医药
1 材料
Agilent 1290超高效液相色谱仪(配有DAD检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器，美国安捷伦公司);SB25-12DTD-500数控超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);METTLER TOLEDO XP6电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);H1650-W台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);Millipore Milli-Q纯水机(美国Millipore公司)。
对照品绿原酸(批号110753-201314)和栀子苷(批号110749-201115)均购自中国食品药品检定研究院;对照品新绿原酸(批号MUST-13013001)，隐绿原酸(批号MUST-13013002)，京尼平苷酸(批号MUST-12121502)，异绿原酸B(批号MUST-14022612)，异绿原酸A(批号MUST-13081402)和异绿原酸C(批号MUST-13081401)均购自成都曼思特生物科技有限公司;对照品山栀苷(批号BBP01688)购自云南西力生物技术有限公司;对照品京尼平龙胆双糖苷(批号121120)购自成都普菲德生物技术有限公司;对照品断氧化马钱子苷由江苏康缘药业股份有限公司提供。绿原酸对照品纯度为96.6%，其他对照品纯度均大于98%。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。
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45批热毒宁注射液(批号分别为Z140201， Z140203， Z140204， Z140205， Z140206， Z140207， Z140208， Z140209， Z140210， Z140211， Z140212， Z140213， Z140214， Z140215， Z140216， Z140217， Z140218， Z140219， Z140220， Z140221， Z140222， Z140223， Z140224， Z140225， Z140226， Z140227， Z140228， Z140229， Z140230， Z140231， Z140232， Z140233， Z140234， Z140301， Z140303， Z140304， Z140305， Z140306， Z140307， Z140308， Z140309， Z140310， Z140311， Z140312， Z140313)均由江苏康缘药业股份有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件, 百拇医药(吴莎 王雪 吴亚男 刘启安 吴建雄 毕宇安 王振中 萧伟)
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[关键词] 超高效液相色谱法; 热毒宁注射液; 多成分含量测定; 指纹图谱; 质量控制
[收稿日期] 2014-09-08
[基金项目] 国家“重大新药创制”科技重大专项(2013ZX09402203)
[通信作者] 萧伟，博士，研究员级高级工程师，研究方向为中药新药的研究与开发，Tel： (0518)85522009，E-mail： wzhzh-nj@163.net
[作者简介] 吴莎，博士研究生，Tel：13675292285，E-mail：wusha729@163.com
热毒宁注射液由金银花、青蒿、栀子组成，具有清热、疏风、解毒功效，临床上用于治疗上呼吸道感染[1]。热毒宁注射液成分研究表明，其主要含有有机酸类和环烯醚萜类化合物[2-3]。前期研究建立了热毒宁注射液HPLC指纹图谱[4]和一测多评法测定热毒宁注射液中的9种成分[5]，上述方法运行时间较长， 针对处方中栀子药材只选择栀子苷作为控制指标较为局限。栀子中富含环烯醚萜类化合物[6-7]，有研究报道同时测定栀子药材中多种环烯醚萜苷类成分含量[8-10]，及有机酸、环烯醚萜苷和色素3类成分含量[11]。超高效液相色谱(UPLC)技术可以大大缩短分析时间，提高分析的灵敏度和分辨率，在中药注射液质量控制方面有较为广泛地应用[12-15]。因此，本研究建立了一种超高效液相色谱方法，同时测定热毒宁注射液中11种成分含量(包括6种有机酸类化合物和5种环烯醚萜类化合物)，并建立热毒宁注射液指纹图谱。该方法简单快捷灵敏，可为热毒宁注射液质量标准提升提供参考。
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1 材料
Agilent 1290超高效液相色谱仪(配有DAD检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器，美国安捷伦公司);SB25-12DTD-500数控超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);METTLER TOLEDO XP6电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);H1650-W台式高速离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限公司);Millipore Milli-Q纯水机(美国Millipore公司)。
对照品绿原酸(批号110753-201314)和栀子苷(批号110749-201115)均购自中国食品药品检定研究院;对照品新绿原酸(批号MUST-13013001)，隐绿原酸(批号MUST-13013002)，京尼平苷酸(批号MUST-12121502)，异绿原酸B(批号MUST-14022612)，异绿原酸A(批号MUST-13081402)和异绿原酸C(批号MUST-13081401)均购自成都曼思特生物科技有限公司;对照品山栀苷(批号BBP01688)购自云南西力生物技术有限公司;对照品京尼平龙胆双糖苷(批号121120)购自成都普菲德生物技术有限公司;对照品断氧化马钱子苷由江苏康缘药业股份有限公司提供。绿原酸对照品纯度为96.6%，其他对照品纯度均大于98%。乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水。
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45批热毒宁注射液(批号分别为Z140201， Z140203， Z140204， Z140205， Z140206， Z140207， Z140208， Z140209， Z140210， Z140211， Z140212， Z140213， Z140214， Z140215， Z140216， Z140217， Z140218， Z140219， Z140220， Z140221， Z140222， Z140223， Z140224， Z140225， Z140226， Z140227， Z140228， Z140229， Z140230， Z140231， Z140232， Z140233， Z140234， Z140301， Z140303， Z140304， Z140305， Z140306， Z140307， Z140308， Z140309， Z140310， Z140311， Z140312， Z140313)均由江苏康缘药业股份有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件, 百拇医药(吴莎 王雪 吴亚男 刘启安 吴建雄 毕宇安 王振中 萧伟)