谷红注射液抗脑缺血性再灌注损伤的作用及其机制(1)
[摘要] 为探讨谷红注射液抗脑缺血再灌注损伤的作用及机制，本实验将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、谷红注射液低、中、高剂量组、尼莫地平注射液组，每组10 只。在建立大鼠大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)模型的基础上，观察大鼠神经功能缺损症状，脑梗死体积比，各组大鼠脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力，丙二醛(MDA)含量，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的活性;以及血清组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制因子(PAI)含量、血栓素B2(TXB2)和 6-酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)的含量。结果表明谷红注射液能显著促进神经功能缺损症状的恢复，缩小大鼠手术后的脑梗死体积，显著提高脑组织中SOD，GSH-Px和CAT活性，降低MDA含量，同时还可显著提高血清中t-PA的含量，降低PAI含量，降低TXB2的含量，提高6-keto-PGF1a含量。说明谷红注射液具有较好的抗氧化和抗血栓的作用，对大鼠脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。
, 百拇医药
[关键词] 谷红注射液;脑缺血再灌注;作用机制
[收稿日期] 2014-05-08
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81373898，81173647，81274176);浙江省中医药(中西医结合)重点学科(2012-XK-A06)
[通信作者] 何昱，Tel：(0571)86613657，E-mail：heyu0923@sina.com
[作者简介] 舒明春，硕士，主要从事中药有效成分分离及药效学研究，Tel：(0571)86633179，E-mail：shumingchun@163.com
脑卒中(stroke)，中医称为中风，是日益严重威胁人类生命与健康的三大疾病之一。过去人们对中风治疗药物的研究多集中于神经元的保护方面，却经常出现动物实验有效、临床试验无效的现象[1]。谷红注射液是由红花提取液和乙酰谷酰胺制成的复方制剂，红花提取液含有红花苷类和红花黄色素等有效成分，具有抗凝血、抗血栓、舒张血管、改善微循环及抗氧自由基等作用，红花及其主要成分羟基红花黄色素A等对缺血性卒中的保护作用已被众多基础研究所证实[2-4];谷氨酰胺是严重疾病(如脑卒中)和外伤情况下的必须氨基酸，多个对照试验已证实谷氨酰胺能够显著改善脑卒中患者的临床预后[5]。谷氨酰胺溶液的不稳定性限制其临床应用，而乙酰谷酰胺是谷氨酰胺乙酰化的衍生物，性质稳定，代谢途径和谷氨酰胺极为类似[6]。大量的临床应用证明，谷红注射液对脑卒中具有良好的疗效，但对其中的作用机制报道甚少[7]。因此本文采用大鼠中动脉栓塞模型，尝试从抗氧化与抗血栓方面探讨谷红注射液抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。
, http://www.100md.com
1 材料
1.1 动物 健康SD雄性大鼠，清洁级，体重(280±20) g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK(沪)2013-0016。
1.2 药品与试剂 谷红注射液(通化谷红制药有限公司，国药准字H22026582，批号 20120808);尼莫地平注射液(拜耳医药保健有限公司，国药准字J20100002，批号 GXG2GG1);BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所，编号P0012);超氧化物歧化酶(SOD，批号20140322)、丙二醛(MDA，批号20140308)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px，批号20140319)、过氧化氢酶(CAT，批号20140326)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。组织型纤溶酶原激活物(t-PA，批号20140306265)、纤溶酶原激活物抑制因子(PAI，批号20140302136)、血栓素B2(TXB2，批号20140308365)、6-酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a，批号20140306543)测定的ELISA试剂盒均购自上海信帆生物科技有限公司。
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1.3 仪器 LDZ5-2低温离心机(北京医用离心机厂);Millipore Simplicity纯水仪(美国Millipore公司);Molecular Devices Spectra MAX Plus 384酶标仪(美国MD公司)。
2 方法
2.1 分组与给药 大鼠随机分为6组：假手术组、脑缺血再灌注组(模型组)、谷红注射液低、中、高剂量组(2.5，5，10 mL·kg-1)、尼莫地平注射液组(10 mL·kg-1)，每组10只。分别于再灌注0，6，23 h腹腔注射给药，假手术组和模型组采取同样方法给予生理盐水。
2.2 大鼠中动脉栓塞模型的制备 按照Zea Longa等[8]方法进行大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)手术，大鼠称重后用10%水合氯醛(3.5 mL·kg-1体重)腹腔注射麻醉，分离右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉。用丝线将颈外动脉结扎，用微型动脉夹将颈总动脉和颈内动脉夹闭。在颈外动脉近分叉部切一小口，将长50 mm、直径0.2 mm、头端光滑圆球状的尼龙线自切口插入，轻轻推进栓线，打开颈内动脉动脉夹，使栓线沿颈内动脉进入大脑中动脉起始端。假手术组尼龙线只插入0.5 cm左右。缺血1.5 h后，轻轻拔出尼龙线，并松开颈总动脉夹进行再灌注。整个过程均在室温(24～25 ℃)下进行。模型成功的标志是模型动物麻醉清醒后出现缺Horner′s征及对侧前肢为主的偏瘫。大鼠再灌注24 h进行各项指标测定。, 百拇医药(舒明春 万海同 周惠芬 杨洁红 赵涛 付巍 何昱)
, 百拇医药
[关键词] 谷红注射液;脑缺血再灌注;作用机制
[收稿日期] 2014-05-08
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81373898，81173647，81274176);浙江省中医药(中西医结合)重点学科(2012-XK-A06)
[通信作者] 何昱，Tel：(0571)86613657，E-mail：heyu0923@sina.com
[作者简介] 舒明春，硕士，主要从事中药有效成分分离及药效学研究，Tel：(0571)86633179，E-mail：shumingchun@163.com
脑卒中(stroke)，中医称为中风，是日益严重威胁人类生命与健康的三大疾病之一。过去人们对中风治疗药物的研究多集中于神经元的保护方面，却经常出现动物实验有效、临床试验无效的现象[1]。谷红注射液是由红花提取液和乙酰谷酰胺制成的复方制剂，红花提取液含有红花苷类和红花黄色素等有效成分，具有抗凝血、抗血栓、舒张血管、改善微循环及抗氧自由基等作用，红花及其主要成分羟基红花黄色素A等对缺血性卒中的保护作用已被众多基础研究所证实[2-4];谷氨酰胺是严重疾病(如脑卒中)和外伤情况下的必须氨基酸，多个对照试验已证实谷氨酰胺能够显著改善脑卒中患者的临床预后[5]。谷氨酰胺溶液的不稳定性限制其临床应用，而乙酰谷酰胺是谷氨酰胺乙酰化的衍生物，性质稳定，代谢途径和谷氨酰胺极为类似[6]。大量的临床应用证明，谷红注射液对脑卒中具有良好的疗效，但对其中的作用机制报道甚少[7]。因此本文采用大鼠中动脉栓塞模型，尝试从抗氧化与抗血栓方面探讨谷红注射液抗大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。
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1 材料
1.1 动物 健康SD雄性大鼠，清洁级，体重(280±20) g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号SCXK(沪)2013-0016。
1.2 药品与试剂 谷红注射液(通化谷红制药有限公司，国药准字H22026582，批号 20120808);尼莫地平注射液(拜耳医药保健有限公司，国药准字J20100002，批号 GXG2GG1);BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术研究所，编号P0012);超氧化物歧化酶(SOD，批号20140322)、丙二醛(MDA，批号20140308)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px，批号20140319)、过氧化氢酶(CAT，批号20140326)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。组织型纤溶酶原激活物(t-PA，批号20140306265)、纤溶酶原激活物抑制因子(PAI，批号20140302136)、血栓素B2(TXB2，批号20140308365)、6-酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a，批号20140306543)测定的ELISA试剂盒均购自上海信帆生物科技有限公司。
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1.3 仪器 LDZ5-2低温离心机(北京医用离心机厂);Millipore Simplicity纯水仪(美国Millipore公司);Molecular Devices Spectra MAX Plus 384酶标仪(美国MD公司)。
2 方法
2.1 分组与给药 大鼠随机分为6组：假手术组、脑缺血再灌注组(模型组)、谷红注射液低、中、高剂量组(2.5，5，10 mL·kg-1)、尼莫地平注射液组(10 mL·kg-1)，每组10只。分别于再灌注0，6，23 h腹腔注射给药，假手术组和模型组采取同样方法给予生理盐水。
2.2 大鼠中动脉栓塞模型的制备 按照Zea Longa等[8]方法进行大脑中动脉局灶性栓塞(MCAO)手术，大鼠称重后用10%水合氯醛(3.5 mL·kg-1体重)腹腔注射麻醉，分离右侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉。用丝线将颈外动脉结扎，用微型动脉夹将颈总动脉和颈内动脉夹闭。在颈外动脉近分叉部切一小口，将长50 mm、直径0.2 mm、头端光滑圆球状的尼龙线自切口插入，轻轻推进栓线，打开颈内动脉动脉夹，使栓线沿颈内动脉进入大脑中动脉起始端。假手术组尼龙线只插入0.5 cm左右。缺血1.5 h后，轻轻拔出尼龙线，并松开颈总动脉夹进行再灌注。整个过程均在室温(24～25 ℃)下进行。模型成功的标志是模型动物麻醉清醒后出现缺Horner′s征及对侧前肢为主的偏瘫。大鼠再灌注24 h进行各项指标测定。, 百拇医药(舒明春 万海同 周惠芬 杨洁红 赵涛 付巍 何昱)