金丝桃苷预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用与PI3K/Akt信号通路的关系(3)
2.5生化指标检测各组大鼠均于再灌注120 min后,腹主动脉取血(约4 mL),离心 15 min(3 000 r·min-1,4 ℃),取上清放入-20 ℃ 冰箱冻存备用。测定血清MDA,SOD,CK,CK-MB,CAT,GSH-Px,TNF-α,IL-6等生化指标,具体操作严格按照试剂盒说明书进行。2.6Western blot法检测心肌p-Akt,Akt,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌缺血再灌注末期,取大鼠左心室结扎线以下约 200 mg组织,在含有50 mmol·L-1 Tris-HCl(pH 7.4),150 mmol·L-1NaCl,5 mmol·L-1 EDTA,1 mmol·L-1二硫苏糖醇,1%Triton X-100和1%蛋白酶抑制剂的裂解液中进行匀浆。将匀浆物离心15 min(12 000×g,4 ℃),取上清液。蛋白质浓度测定采用BCA蛋白定量试剂盒 ......
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