大株红景天的化学成分及体外抗肿瘤转移活性研究(5)
4抗肿瘤转移实验首先以MTT法测定各化合物对人乳腺癌细胞的毒性(表1),选择非细胞毒性的浓度进行抗肿瘤转移活性筛选。
各化合物对人乳腺癌细胞趋化迁移的抑制作用在Transwell小室上腔直接将8μm孔径滤膜安放在侵袭腔室的上下腔室之间,肿瘤细胞在趋化因子诱导下通过变形运动穿过滤膜,通过衡量与测试药物共培养的肿瘤细胞和空白组肿瘤细胞趋化穿过滤膜的细胞数量变化,来表达测试药物抑制肿瘤细胞的趋化迁移能力的大小,进而评价测试药物抗肿瘤转移的活性强弱。
实验步骤:将MD-MBA-231细胞铺于6孔板,置于37℃,5%CO2的孵箱内培养24h使其贴壁,然后加入样品,37℃5%CO2孵箱内共孵育24h。孵育后每孔细胞分别用0.25%的胰酶消化,用含10%FBS的培养液终止消化,1300r·min-1离心5min,倒出上清,加0.1%的BM将细胞混匀后再次1300r·min-1离心5min,计数,将细胞密度调成5×105 ......
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