3种姜黄色素抗血管生成及相关因子表达作用研究(3)
2.5Real-timePCR检测3种姜黄色素对HUVEC细胞黏附因子ICAM,VCAM的影响将HUVEC细胞经不同浓度的3种姜黄色素处理24h后按TRIzolReagent说明书提取总RNA,溶解于DEPC处理水中。取1μg总RNA,在20μL体系中以Oligo(dT)18为引物,用AMV逆转录酶合成第一链cDNA。荧光PCR扩增反应:ddH2O8μL,2×SYBRPCRMasterMix10μL,上下游引物各0.5μL,cDNA1μL,反应体系为20μL。进行荧光定量PCR扩增,反应条件为94℃预变性3min;94℃变性30s;50~55℃退火30s;72℃延伸30s,循环40次;72℃延伸3min。每个样品重复3次。每一个样品的的Ct值,以空白对照组为对照,以GAPDH为内参,计算ICAM,VCAM目标基因的相对表达量2-ΔΔCt。ΔΔCt=(待测组目的基因平均Ct-待测组内参基因平均Ct)-(对照组目的基因平均Ct-对照组内参基因平均Ct)。
2.6统计分析统计学分析应用SPSS17统计软件。计量资料以表示,二组间比较用t检验 ......
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