藏药羌活鱼的COⅠ分子鉴定(1)
[摘要]对动物线粒体基因COⅠ进行PCR扩增及双向测序，得到羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎的COⅠ基因序列。通过序列分析比对，根据序列差异设计特异性引物SJYW1，SJYW2，改变退火温度及循环数以得到特异性的反应条件。结果表明，当复性温度为54 ℃，25个循环时，正品羌活鱼在约350 bp处有明显扩增带，而无斑肥源和截趾虎没有扩增带。该实验具有较高的特异性、重复性，可用于羌活鱼的鉴别。
[关键词]羌活鱼;山溪鲵;混伪品;PCR;特异性;分子鉴定
[收稿日期]2014-07-25
[基金项目]国家药典委员会民族药材质量标准研究项目(M13)
[通信作者]*梅之南， 教授， 博士生导师， 研究方向为民族药物的药效基础，Tel： (027)67841196， Fax： (027)67843713， E-mail： meizhinan@163.comMolecular identification of Tibetan medicine Qianghuoyu by COⅠ
, http://www.100md.com
DU Wen-jie1， LIU Hai-qing2， XU Jing1， LUO Gui-fa2， MEI Zhi-nan1*
(1. College of Pharmacy， South-central University for Nationalities， Wuhan 430074， China;
2. Qinghai Institute for Food and Drug Control， Xining 810016， China)
[Abstract]The COⅠ gene sequences of Qianghuoyu， Pachytriton labiatus and Gehyra mutilata were achieved by PCR amplification and bi-directional sequencing. Furthermore， a pair of specific primers SJYW1 and SJYW2 in the non-conservative district were designed through sequence alignment. The PCR reaction condition was established by changing the annealing temperature and cycle numbers. The results showed that 350 bp DNA fragment was amplified from Qianghuoyu in PCR with annealed temperature at 54 ℃ and the cycle number was 25 cycles， whereas not any DNA fragment was amplified from P. labiatus and G. mutilata under the same reaction condition. This method is well-performed in the identification of Qianghuoyu for its excellent specificity and repeatability.
, 百拇医药
[Key words]Qianghuoyu; Batrachuperus; adulterants; PCR; specificity; molecular identification
doi：10.4268/cjcmm20150305
藏药羌活鱼又名杉木鱼、娃娃鱼等，藏医入药包括2种：山溪鲵Batrachuperus pinchonii，西藏山溪鲵B. tibetanus[1]。其不仅可以治疗肝胃气痛、血虚脾弱、面色萎黄等症[2-3]，还具有续断接骨，滋补强身的功效。临床常用于治疗跌打损伤和关节疼痛。通过对市场上调查发现，流通商品中多以蛤蚧Gekko gecko、壁虎G. swinhoanis、无斑肥源Pachytriton labiatus、截趾虎Gehyra mutilata等混做正品销售。从外形上只能将壁虎和蛤蚧与羌活鱼区分开来。
, http://www.100md.com 随着分子生物技术的发展，通过DNA序列比较鉴别中药材，是非常准确、方便、有效的方法。1996年DeSalle等[4]首次报道了根据已知的鲟鱼DNA序列信息，设计了特异性引物对鱼子酱中鱼子种类的鉴别。唐晓晶等利用高特异性PCR方法鉴别乌梢蛇[5]、蕲蛇[6]及其混淆品。本实验建立了高特异性PCR方法鉴别羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎。
1材料
1.1药材羌活鱼及其混伪品来自于四川，青海，重庆等地，具体见表1。实验材料由青海省食品药品检验所藏药室骆桂法主任药师提供并鉴定，均为干材料。
表1实验材料的种类及来源
Table 1Source of species of crude drugs
No.种类地点1山溪鲵1 Batrachuperus pinchonii 1青海西宁2山溪鲵2 B. pinchonii 2四川成都3山溪鲵3 B. pinchonii 3青海西宁4山溪鲵4 B. pinchonii 4青海西宁5西藏山溪鲵1 Batrachuperus tibetanus 1青海玉树6西藏山溪鲵2 B. tibetanus 2重庆渝中7西藏山溪鲵3 B. tibetanus 3四川成都A无斑肥源1 Pachytriton labiatus 1吉林龙泰B无斑肥源2 P. labiatus 2武汉三九C截趾虎1 Gehyra mutilata 1吉林龙泰D截趾虎2 G. mutilata 2武汉三九E蛤蚧 Gekko gecko武汉三九F壁虎 G. swinhoanis青海玉树, 百拇医药(杜文杰 刘海青 徐婧 骆桂法 梅之南)
[关键词]羌活鱼;山溪鲵;混伪品;PCR;特异性;分子鉴定
[收稿日期]2014-07-25
[基金项目]国家药典委员会民族药材质量标准研究项目(M13)
[通信作者]*梅之南， 教授， 博士生导师， 研究方向为民族药物的药效基础，Tel： (027)67841196， Fax： (027)67843713， E-mail： meizhinan@163.comMolecular identification of Tibetan medicine Qianghuoyu by COⅠ
, http://www.100md.com
DU Wen-jie1， LIU Hai-qing2， XU Jing1， LUO Gui-fa2， MEI Zhi-nan1*
(1. College of Pharmacy， South-central University for Nationalities， Wuhan 430074， China;
2. Qinghai Institute for Food and Drug Control， Xining 810016， China)
[Abstract]The COⅠ gene sequences of Qianghuoyu， Pachytriton labiatus and Gehyra mutilata were achieved by PCR amplification and bi-directional sequencing. Furthermore， a pair of specific primers SJYW1 and SJYW2 in the non-conservative district were designed through sequence alignment. The PCR reaction condition was established by changing the annealing temperature and cycle numbers. The results showed that 350 bp DNA fragment was amplified from Qianghuoyu in PCR with annealed temperature at 54 ℃ and the cycle number was 25 cycles， whereas not any DNA fragment was amplified from P. labiatus and G. mutilata under the same reaction condition. This method is well-performed in the identification of Qianghuoyu for its excellent specificity and repeatability.
, 百拇医药
[Key words]Qianghuoyu; Batrachuperus; adulterants; PCR; specificity; molecular identification
doi：10.4268/cjcmm20150305
藏药羌活鱼又名杉木鱼、娃娃鱼等，藏医入药包括2种：山溪鲵Batrachuperus pinchonii，西藏山溪鲵B. tibetanus[1]。其不仅可以治疗肝胃气痛、血虚脾弱、面色萎黄等症[2-3]，还具有续断接骨，滋补强身的功效。临床常用于治疗跌打损伤和关节疼痛。通过对市场上调查发现，流通商品中多以蛤蚧Gekko gecko、壁虎G. swinhoanis、无斑肥源Pachytriton labiatus、截趾虎Gehyra mutilata等混做正品销售。从外形上只能将壁虎和蛤蚧与羌活鱼区分开来。
, http://www.100md.com 随着分子生物技术的发展，通过DNA序列比较鉴别中药材，是非常准确、方便、有效的方法。1996年DeSalle等[4]首次报道了根据已知的鲟鱼DNA序列信息，设计了特异性引物对鱼子酱中鱼子种类的鉴别。唐晓晶等利用高特异性PCR方法鉴别乌梢蛇[5]、蕲蛇[6]及其混淆品。本实验建立了高特异性PCR方法鉴别羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎。
1材料
1.1药材羌活鱼及其混伪品来自于四川，青海，重庆等地，具体见表1。实验材料由青海省食品药品检验所藏药室骆桂法主任药师提供并鉴定，均为干材料。
表1实验材料的种类及来源
Table 1Source of species of crude drugs
No.种类地点1山溪鲵1 Batrachuperus pinchonii 1青海西宁2山溪鲵2 B. pinchonii 2四川成都3山溪鲵3 B. pinchonii 3青海西宁4山溪鲵4 B. pinchonii 4青海西宁5西藏山溪鲵1 Batrachuperus tibetanus 1青海玉树6西藏山溪鲵2 B. tibetanus 2重庆渝中7西藏山溪鲵3 B. tibetanus 3四川成都A无斑肥源1 Pachytriton labiatus 1吉林龙泰B无斑肥源2 P. labiatus 2武汉三九C截趾虎1 Gehyra mutilata 1吉林龙泰D截趾虎2 G. mutilata 2武汉三九E蛤蚧 Gekko gecko武汉三九F壁虎 G. swinhoanis青海玉树, 百拇医药(杜文杰 刘海青 徐婧 骆桂法 梅之南)