基于熔解曲线分析技术的鹿茸药材分子鉴别(2)
高分辨率熔解曲线(high resolution melting, HRM)是结合饱和荧光染料、未标记探针和实时荧光定量PCR的一种新的检测基因突变与基因分型的分子诊断技术。早在20世纪70年代HRM的概念就已经提出并应用于相关的研究实验[10],后经由Ririe等[11]进一步发展,有高通量、低成本、简单快捷、结果准确、灵敏度和特异性高和真正闭管操作等优点[12-13],在疾病诊断[14-15]、种质资源鉴定[16-18]等方面广泛应用。本文基于动物DNA条形码COⅠ序列,采用高分辨率熔解曲线分析,建立鹿茸药材正品熔解曲线,并通过比对鹿茸药材DNA扩增熔解曲线的峰形和Tm位置来鉴别鹿茸药材真伪。1材料
LightCycler480型实时荧光定量PCR仪(Roche公司),5810R型低温冷冻离心(Eppendorf公司) ......
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