从蛋白质自组装的角度探析甘草附子配伍减毒机制(3)
1.9甘草蛋白颗粒对乌头碱包埋率测定采用截留相对分子质量为100 kDa的超滤管对反应后的甘草蛋白-乌头碱混合液进行超滤。按1.8项所述方法测定滤过液中乌头碱含量,根据公式E=(C-C1)×C计算形成的甘草蛋白-乌头碱(GP-AC)胶体颗粒对乌头碱的包埋率,式中,C为总的乌头碱浓度,C1为滤过液中乌头碱浓度。
1.10小鼠急性毒性试验
选取健康ICR小白鼠(雌雄随机,购于福州海王福药制药有限公司),体重(15±1.0) g,随机分组,每组8只。急性毒性实验前,动物提前禁食12 h。将0.2 mL不同实验样品分别通过腹腔注射后,观察给药后3 h各组小白鼠的反应并记录其死亡时间。不同实验组及所注射样品见表1。
2结果
2.1甘草蛋白纯化
经乙醇沉降后的甘草蛋白粗提液中,存在多个相对分子质量介于14.0~66.2 kDa的蛋白条带,目的蛋白GP在SDS-PAGE中相对分子质量大约为31.0 kDa,也是甘草粗提液中含量最高的蛋白质,见图1。通过进一步使用离子交换色谱High-Q柱以及疏水色谱POROS R1两步色谱法分离后 ......
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