一株拟茎点霉属中新的色原烯及其肿瘤细胞抑制活性研究(2)
1.4肿瘤细胞抑制活性分析肿瘤细胞抑制活性实验采用MTT方法进行测试,将DMSO溶解的一系列浓度的化合物(DMSO的终浓度为1%)加入到培养好的96孔板细胞中,置于37 ℃的5% CO2培养箱中培养48 h。采用MTT染料对活细胞染色,次日用Bio-Rad680酶标仪在波长570 nm下测定A,来研究化合物对肿瘤细胞抑制能力。阴性对照为1%的DMSO,阳性对照为5-氟尿嘧啶;每个实验重复3次,计算平均值。经SPSS 13.0软件Probit分析,计算出IC50。1.5提取与分离方法发酵结束后,将发酵样品进行机械粉碎,用乙酸乙酯浸提3次后,减压蒸干,得到褐色油状粗提物10 g。通过硅胶色谱柱分离、凝胶Sephadex LH-20色谱分离和反相色谱制备得到7个化合物1~7。具体分离过程如下:减压硅胶柱分离,石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱得到馏分2(0.84 g,9∶1)、馏分4(0.31 g,6∶4)、馏分5(0.56 g,4∶6)和馏分6 (0.34 g,1∶9)。对减压硅胶洗脱后的馏分2进一步用凝胶Sephadex LH-20柱色谱(3.4 cm×52 cm)分离 ......
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