蒙成药中“地格达”类原料药材的位点特异性PCR鉴别研究(3)
2 结果2.1 8种蒙成药DNA 提取与PCR成功率 电泳检测结果表明8种蒙成药DNA条带较弱,暗示该DNA的浓度较低。但利用该DNA进行通用引物rbcL(1F/724R)PCR反应,5种蒙成药的PCR扩增产物经电泳后均可显示出较亮条带,而另外3种蒙成药PCR扩增产物经电泳后均显示较弱的条带,见图1。结果显示,采用的改良CTAB法提取8种蒙成药的总DNA可成功用于成药的分子鉴别。
2.2 蒙成药中肋柱花原料特异性鉴别 将8种蒙成药DNA作为模板,利用肋柱花特异引物LR-F/R进行PCR扩增,反应结束后在PCR体系中加入5 μL 6×loading buffer,混匀后于EB染色的1.5%琼脂糖凝胶电泳检测,SYNGENE凝胶成像系统观察、成像。检测结果表明, 3种中成药(MPM01,MPM02,MPM03)在以上PCR反应条件下均可以稳定的扩增出232 bp条带,而其他蒙成药都未检测到特异条带,见图2,表5。 扩增后的PCR产物进一步测序,所得序列去除引物序列后,并在GenBank数据库中进行BlastN分析,与报道的肋柱花序列(GenBank number: HM460865)相比 ......
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