狭苞橐吾根的化学成分研究(1)
[摘要] 利用各种色谱分离技术，从狭苞橐吾Ligularia intermedia根的75%乙醇提取物中分离得到6个化合物，通过理化数据和波谱数据鉴定化合物的结构分别为8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(1)，蜂斗菜素(2)，咖啡酸(3)，正二十七烷醇(4)，β-谷甾醇(5)和β-胡萝卜苷(6)。其中化合物1为新化合物。
[关键词] 橐吾属;狭苞橐吾;倍半萜
[收稿日期] 2014-11-11
[基金项目] 河北省科技支撑计划项目(10237101D)
[通信作者] 李树立，硕士，副教授，Tel：(0311)87655680，E-mail：lishuli6318@sina.com
, 百拇医药
Chemical constituents from roots of Ligularia intermedia
LI Shu-li， ZHANG Xiang-mei， LIU Yu-heng ， HAO Qiu-juan， LI Na ， ZHANG Rui-ping
(1. College of Biology science and Engineering， Hebei Economy and Trade University， Shijiazhuang 050061， China;
2. Basic Medical College， Hebei Medical University， Shijiazhuang 050017， China)
[Abstract] A new sesquiterpenoid， 8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(1)and five known compounds， petasin(2)， caffeic acid(3)， hepta-cosanol(4)， β-sitosterol(5) and β-daucosterol(6) have been isolated from the roots of Ligularia intermedia. The compounds were isolatedby column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20， and identifiedbasedonspectral analyses (MS，1H-NMR， 13C-NMR)
, 百拇医药
[Key words] Ligularia; Ligularia intermedia; Sesquiterpenoid
doi：10.4268/cjcmm20150521
狭苞橐吾Ligularia intermedia Nakai 为菊科橐吾属植物，产于云南西北和东北部、四川、贵州、湖北、湖南、河南、甘肃、陕西、华北及东北等地[1]。橐吾属植物含有各种丰富的化学成分，在抗肿瘤、消炎、镇咳等方面发挥着重要作用，狭苞橐吾为其中的一种，该植物为多年生草本，其根及根茎在民间作为山紫苑长期入药，用于治疗流行性感冒、咳嗽、肺结核及溃疡等症[2]。课题组前期从狭苞橐吾地上部分分离得到4个化合物，其中有1个倍半萜为新化合物[3]。为继续深入研究和开发狭苞橐吾植物资源，课题组又对狭苞橐吾的根进行了化学成分研究。从狭苞橐吾的根中分离得到6个化合物，利用核磁共振等现代波谱数据并结合文献对比，将化合物确定为8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(1)，蜂斗菜素(2)，咖啡酸(3)，正二十七烷醇(4)，β-谷甾醇(5)和β-胡萝卜苷(6)。其中化合物1为新化合物。
, 百拇医药
1 材料
BT224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，北京);X-6显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司，北京);Agilent-1100-LC/MSD-Trap(美国安捷伦科技有限公司);Bruker APEX质谱仪(瑞士布鲁克公司);Bruker-VERTEX 70 FT-IR红外光谱仪;Bruker AV 600超导核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司)。薄层色谱硅胶GF254与柱色谱硅胶(200～300目)(青岛海洋化工有限公司);Sephadex LH-20(Pharmacia)。其余试剂均为国产分析纯。狭苞橐吾根于2011年8月采自河北省小五台山。
2 提取与分离
狭苞橐吾药材0.4 kg，75%乙醇浸提，每次浸泡提取1周，提取3次。提取液回收乙醇，得浸膏24.3 g。所得浸膏用硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(15∶1～0∶1)洗脱。石油醚-乙酸乙酯(10∶1)洗脱部分TLC检测合并，以石油醚-丙酮(8∶1) 洗脱，得到化合物4(23.7 mg)和化合物5(19.5 mg)。石油醚-乙酸乙酯(8∶1) 洗脱部分TLC检测合并，以石油醚-丙酮(10∶1) 洗脱，得到化合物2(13.1 mg)。石油醚-乙酸乙酯(5∶1) 洗脱部分点板后合并，以石油醚-丙酮(10∶1) 洗脱，得到化合物1(1.7 mg)。石油醚-乙酸乙酯(2∶1) 部分经过Sephadex LH-20反复柱层析，得到化合物3(5.1 mg)。石油醚-乙酸乙酯(1∶1) 洗脱部分点板后合并，以氯仿-甲醇(7∶1) 洗脱，得到化合物6(13.2 mg)。
, 百拇医药
3 结构鉴定
化合物1 无色油状。[α]20D-75.5(c 0.21，CHCl3)。HR-ESI-MS m/z 293.137 5[M+H]+(计算值为293.138 9)，分子式为C16H20O5，不饱和度为7。1H-NMR显示化合物有4个甲基信号：δH0.77(3H，d，J=6.2 Hz，H-14)，1.01(3H，s，H-15)，1.98(3H，s，H-13)，δH3.38(3H，s，OCH3);1个三取代双键质子信号δH6.65(1H，s，H-9);1个连氧碳上的质子信号δH4.12(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)。13C-NMR给出16个碳原子信号峰，包括4个甲基信号峰δC9.0(C-13)，14.4(C-14)，18.5(C-15)，δC58.2(OCH3);1个三取代双键信号：δC125.4(C-9)，147.6(C-10);2个连氧碳原子信号δC78.9(C-6)，100.5(C-8);1个酮羰基信号δC201.5(C-1) 以及1个酯羰基信号δC170.2(C-12)，以上信号推测该化合物为艾里莫芬烷型倍半萜化合物。1H-1H COSY谱显示H-3与H-2，H-4有相关，提示该化合物1位有酮羰基。化合物波谱数据与文献[4]中报导的化合物6β，8α-dihydroxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide数据极其相似，所不同的是，化合物1在6位连有甲氧基而不是连有羟基。HMBC谱中，H-6与C-4(δC33.1)，C-5(δC49.3)，C-7(δC153.4)，C-11(δC131.1)和OCH3(δC58.2)有远程相关，证实甲氧基连在C-6位;H-9与C-1，C-10，C-5，C-8有远程相关，证实双键位于9位和10位。艾里莫芬烷型倍半萜化合物Me-14与Me-15均在一侧，为β构型。根据文献[5]报道，化合物1的15位质子信号相对于14位质子信号而言，其氢谱化学位移处于低场，因此化合物1的内酯环应该为8β(12)型，8位羟基为α构型。此外，根据文献[6]的报道，在化合物内酯环为8β(12)构型情况下，当6位质子为α构型时，H-6与Me-13之间的偶合常数会在1.2～1.5。化合物1的H-6与Me-13的偶合常数为1.2 Hz，判定6位质子为α构型，所连接甲氧基为β构型。结合NOE差谱：照射H-6，发现H-4有增益，表明H-6与H-4在同一侧均为α构型。至此，化合物1的相对构型确定，是新的艾里莫芬烷型倍半萜化合物，命名为8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(图1)。, 百拇医药(李树立 张香美 刘玉衡 郝秋娟 李娜 张瑞平)
[关键词] 橐吾属;狭苞橐吾;倍半萜
[收稿日期] 2014-11-11
[基金项目] 河北省科技支撑计划项目(10237101D)
[通信作者] 李树立，硕士，副教授，Tel：(0311)87655680，E-mail：lishuli6318@sina.com
, 百拇医药
Chemical constituents from roots of Ligularia intermedia
LI Shu-li， ZHANG Xiang-mei， LIU Yu-heng ， HAO Qiu-juan， LI Na ， ZHANG Rui-ping
(1. College of Biology science and Engineering， Hebei Economy and Trade University， Shijiazhuang 050061， China;
2. Basic Medical College， Hebei Medical University， Shijiazhuang 050017， China)
[Abstract] A new sesquiterpenoid， 8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(1)and five known compounds， petasin(2)， caffeic acid(3)， hepta-cosanol(4)， β-sitosterol(5) and β-daucosterol(6) have been isolated from the roots of Ligularia intermedia. The compounds were isolatedby column chromatography on silica gel and Sephadex LH-20， and identifiedbasedonspectral analyses (MS，1H-NMR， 13C-NMR)
, 百拇医药
[Key words] Ligularia; Ligularia intermedia; Sesquiterpenoid
doi：10.4268/cjcmm20150521
狭苞橐吾Ligularia intermedia Nakai 为菊科橐吾属植物，产于云南西北和东北部、四川、贵州、湖北、湖南、河南、甘肃、陕西、华北及东北等地[1]。橐吾属植物含有各种丰富的化学成分，在抗肿瘤、消炎、镇咳等方面发挥着重要作用，狭苞橐吾为其中的一种，该植物为多年生草本，其根及根茎在民间作为山紫苑长期入药，用于治疗流行性感冒、咳嗽、肺结核及溃疡等症[2]。课题组前期从狭苞橐吾地上部分分离得到4个化合物，其中有1个倍半萜为新化合物[3]。为继续深入研究和开发狭苞橐吾植物资源，课题组又对狭苞橐吾的根进行了化学成分研究。从狭苞橐吾的根中分离得到6个化合物，利用核磁共振等现代波谱数据并结合文献对比，将化合物确定为8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(1)，蜂斗菜素(2)，咖啡酸(3)，正二十七烷醇(4)，β-谷甾醇(5)和β-胡萝卜苷(6)。其中化合物1为新化合物。
, 百拇医药
1 材料
BT224S电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司，北京);X-6显微熔点仪(北京泰克仪器有限公司，北京);Agilent-1100-LC/MSD-Trap(美国安捷伦科技有限公司);Bruker APEX质谱仪(瑞士布鲁克公司);Bruker-VERTEX 70 FT-IR红外光谱仪;Bruker AV 600超导核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司)。薄层色谱硅胶GF254与柱色谱硅胶(200～300目)(青岛海洋化工有限公司);Sephadex LH-20(Pharmacia)。其余试剂均为国产分析纯。狭苞橐吾根于2011年8月采自河北省小五台山。
2 提取与分离
狭苞橐吾药材0.4 kg，75%乙醇浸提，每次浸泡提取1周，提取3次。提取液回收乙醇，得浸膏24.3 g。所得浸膏用硅胶柱色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯(15∶1～0∶1)洗脱。石油醚-乙酸乙酯(10∶1)洗脱部分TLC检测合并，以石油醚-丙酮(8∶1) 洗脱，得到化合物4(23.7 mg)和化合物5(19.5 mg)。石油醚-乙酸乙酯(8∶1) 洗脱部分TLC检测合并，以石油醚-丙酮(10∶1) 洗脱，得到化合物2(13.1 mg)。石油醚-乙酸乙酯(5∶1) 洗脱部分点板后合并，以石油醚-丙酮(10∶1) 洗脱，得到化合物1(1.7 mg)。石油醚-乙酸乙酯(2∶1) 部分经过Sephadex LH-20反复柱层析，得到化合物3(5.1 mg)。石油醚-乙酸乙酯(1∶1) 洗脱部分点板后合并，以氯仿-甲醇(7∶1) 洗脱，得到化合物6(13.2 mg)。
, 百拇医药
3 结构鉴定
化合物1 无色油状。[α]20D-75.5(c 0.21，CHCl3)。HR-ESI-MS m/z 293.137 5[M+H]+(计算值为293.138 9)，分子式为C16H20O5，不饱和度为7。1H-NMR显示化合物有4个甲基信号：δH0.77(3H，d，J=6.2 Hz，H-14)，1.01(3H，s，H-15)，1.98(3H，s，H-13)，δH3.38(3H，s，OCH3);1个三取代双键质子信号δH6.65(1H，s，H-9);1个连氧碳上的质子信号δH4.12(1H，d，J=1.2 Hz，H-6)。13C-NMR给出16个碳原子信号峰，包括4个甲基信号峰δC9.0(C-13)，14.4(C-14)，18.5(C-15)，δC58.2(OCH3);1个三取代双键信号：δC125.4(C-9)，147.6(C-10);2个连氧碳原子信号δC78.9(C-6)，100.5(C-8);1个酮羰基信号δC201.5(C-1) 以及1个酯羰基信号δC170.2(C-12)，以上信号推测该化合物为艾里莫芬烷型倍半萜化合物。1H-1H COSY谱显示H-3与H-2，H-4有相关，提示该化合物1位有酮羰基。化合物波谱数据与文献[4]中报导的化合物6β，8α-dihydroxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide数据极其相似，所不同的是，化合物1在6位连有甲氧基而不是连有羟基。HMBC谱中，H-6与C-4(δC33.1)，C-5(δC49.3)，C-7(δC153.4)，C-11(δC131.1)和OCH3(δC58.2)有远程相关，证实甲氧基连在C-6位;H-9与C-1，C-10，C-5，C-8有远程相关，证实双键位于9位和10位。艾里莫芬烷型倍半萜化合物Me-14与Me-15均在一侧，为β构型。根据文献[5]报道，化合物1的15位质子信号相对于14位质子信号而言，其氢谱化学位移处于低场，因此化合物1的内酯环应该为8β(12)型，8位羟基为α构型。此外，根据文献[6]的报道，在化合物内酯环为8β(12)构型情况下，当6位质子为α构型时，H-6与Me-13之间的偶合常数会在1.2～1.5。化合物1的H-6与Me-13的偶合常数为1.2 Hz，判定6位质子为α构型，所连接甲氧基为β构型。结合NOE差谱：照射H-6，发现H-4有增益，表明H-6与H-4在同一侧均为α构型。至此，化合物1的相对构型确定，是新的艾里莫芬烷型倍半萜化合物，命名为8α-hydroxy-6β-methoxy-1-oxoeremophila-7(11)，9(10)-diene-12，8-olide(图1)。, 百拇医药(李树立 张香美 刘玉衡 郝秋娟 李娜 张瑞平)