桂枝茯苓胶囊及其活性成分组合物抗炎作用与机制研究(3)
2.4Western blot 分析法检测IL-1β和mPGES-1蛋白表达取细胞悬液接种于培养瓶中,37 ℃,5% CO2细胞培养箱中培养24 h后,样品组分别给予100 mg·L-1的桂枝茯苓胶囊或活性成分组合物,预处理1 h后再加入LPS(终浓度1 mg·L-1),模型组用含0.1% DMSO的培养基预处理1 h后,加入LPS(终浓度1 mg·L-1);溶剂对照组加入含0.1% DMSO的培养基,空白组仅加入培养基,继续培养24 h。收集细胞,加入细胞裂解液充分裂解后离心制备蛋白样品。BCA法进行蛋白定量后加入凝胶加样缓冲液中,煮沸使蛋白质变性。用10%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离,用半干转膜仪转移至PVDF膜上,5% BSA封闭2 h,加入一抗后4 ℃孵育过夜。TBST清洗后,加入辣根过氧化物酶标记的二抗孵育 2 h,ECL发光法显色后置于凝胶成像系统进行检测分析 ......
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