雷公藤牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶基因全长cDNA的获得及生物信息学分析(2)
本文通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术从雷公藤悬浮细胞中获得了1条1 857 bp的GGPPS基因全长cDNA,并进行生物信息学分析,为深入研究雷公藤甲素的生物合成途径奠定基础。1材料
1.1雷公藤雷公藤愈伤组织,在0.5 mg·L-1 2,4-D+0.1 mg·L-1 KT+0.5 mg·L-1 IBA+MS琼脂固体培养基中,25 ℃,光照16 h/黑暗8 h培养。雷公藤悬浮细胞为本实验室利用相同激素配比的MS液体培养基,25 ℃,120 r·min-1黑暗条件振荡培养获得,并继代保存。
1.2菌株Escherichia coli DH5 α购自北京全式金生物技术有限公司。
1.3试剂及仪器Ex Taq酶、PrimeSTAR GXL DNA Polymerase、pMD19-T载体、PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit均购自TaKaRa宝生物工程(大连)有限公司 ......
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