不同月龄蚂蟥消化酶活性的研究(2)
2.2.2脂肪酶活力测定采用对-棕榈酸硝基苯酯(ρ-NPP)比色法[6]于10 mL试管中加入3.6 mL的缓冲液和0.2 mL ρ-NPP溶液，在37 ℃水浴锅内保温5 min，加入脂肪酶液0.2 mL，迅速摇匀，再于37 ℃水浴5 min，进行酶促反应后，立即加入1 mL 10%三氯乙酸溶液终止反应，迅速摇匀，最后加入1 mL 10%Na2CO3溶液，摇匀后410 nm处测吸光度A1。(以0.2 mL已煮沸失活的酶液做空白对照)。在一定反应条件下，1 min催化释放1 μmol对硝基酚的酶量定义为1个活力单位(U · mL-1)。
脂肪酶活力计算公式A= [(A1-A0)×K+C0]×V1×n/(V2×t)
式中A样品酶活(U·mL-1);A1样品酶液的吸光度;A0对应酶液的空白吸光度;K对-硝基酚标准曲线的斜率;C0对-硝基酚标准曲线的截距;n稀释倍数;V1反应液的体积(L);V2酶液的体积(L);t反应时间(min)。
2.2.3蛋白酶活力测定采用福林-酚法[7]在37 ℃和已定的pH条件下，每分钟水解干酪素产生1 μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。
2.2.4蛋白质含量的测定消化道提取的粗酶液中可溶性蛋白的含量测定按照考马斯亮蓝法[7] ......
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脂肪酶活力计算公式A= [(A1-A0)×K+C0]×V1×n/(V2×t)
式中A样品酶活(U·mL-1);A1样品酶液的吸光度;A0对应酶液的空白吸光度;K对-硝基酚标准曲线的斜率;C0对-硝基酚标准曲线的截距;n稀释倍数;V1反应液的体积(L);V2酶液的体积(L);t反应时间(min)。
2.2.3蛋白酶活力测定采用福林-酚法[7]在37 ℃和已定的pH条件下，每分钟水解干酪素产生1 μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。
2.2.4蛋白质含量的测定消化道提取的粗酶液中可溶性蛋白的含量测定按照考马斯亮蓝法[7] ......
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