铁皮石斛转录因子基因DoWRKY1的克隆与表达分析(2)

http://www.100md.com 2015年4月1日 中国中药杂志2015年第7期

     本研究通过克隆铁皮石斛DoWRKY1转录因子基因全长cDNA，利用生物信息学对其序列的结构和功能进行初步预测分析，丰富WRKY家族数据库;通过酵母单杂交对DoWRKY1的转录激活活性进行分析;同时，采用半定量RT-PCR分析DoWRKY1的表达谱;实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR)分析DoWRKY1对茉莉酸甲酯(MeJA)和壳聚糖的响应情况，以期为后续深入研究DoWRKY1的功能奠定一定的理论基础。

    1材料

    1.1植物样品及处理铁皮石斛试管苗，取自安徽农业大学生命科学学院植物组织培养室，经安徽农业大学蔡永萍教授鉴定为铁皮石斛D. officinale。选取生长健壮的试管苗用于总RNA提取及cDNA合成，用于基因克隆;在液氮处理下，分离整株苗的根、茎和叶，并取铁皮石斛类原球茎(protocorm-likebodies， PLBs)^[9]为材料 ......