铁皮石斛转录因子基因DoWRKY1的克隆与表达分析(3)
2.5DoWRKY1表达模式分析根据已获得的DoWRKY1全长序列设计特异性引物Q-DoWRKY1-F，Q-DoWRKY1-R;以铁皮石斛18S rRNA (GenBank： KC465231.1)作为内参基因[10]，设计内参引物18S rRNA-F，18S rRNA-R，引物序列见表1，采用半定量RT-PCR分析DoWRKY1在铁皮石斛根、茎、叶和类原球茎中的表达模式。反应总体积为25 μL，包括反转录产物2 μL，10×Easy Taq Buffer 2.5 μL，dNTPs(2.5 mmol·L-1) 2.0 μL，基因上、下游引物(10 μmol·L-1)各1.5 μL， Easy Taq DNA 聚合酶(5 U·μL-1)0.25 μL，补充ddH2O至25 μL。PCR扩增程序如下：94 ℃预变性5 min;94 ℃变性45 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，共25个循环;最后72 ℃延伸10 min ......
您现在查看是摘要页，全文长 3735 字符。
您现在查看是摘要页，全文长 3735 字符。