姜辣素拮抗半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞所致炎症因子TNF—α释放增加、ROS过量生成及RIP3表达增高(3)
2.4 姜辣素对半夏凝集素蛋白刺激巨噬细胞引起的ROS过量生成的影响
纯化的巨噬细胞以1×106个/mL种于12孔板内，在实验前用D-Hanks缓冲液清洗数次，并加入新鲜配制的含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液。将半夏凝集素蛋白溶解于D-Hanks缓冲液中，配制成不同浓度的溶液。巨噬细胞分为7组，每组设置3个复孔，其中6组给予相同浓度的半夏凝集素蛋白溶液(50 mg·L-1)，空白组给予相同体积的D-Hanks缓冲液，其中3组给予不同浓度的姜辣素溶液(20，200，2 000 mg·L-1)，另外2组给予阿司匹林溶液(10，50 mg·L-1)，摇晃均匀后于37 ℃，5%CO2环境中孵育。1 h后弃去细胞上清液，加入用RPMI-1640培养液稀释2 500倍的ROS探针孵育，20 min后在倒置荧光显微镜下观察探针显色情况，放大倍数200倍，激发波长598 nm。随即使用荧光酶标仪定量检测探针发光量，激发波长560 nm ......
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纯化的巨噬细胞以1×106个/mL种于12孔板内，在实验前用D-Hanks缓冲液清洗数次，并加入新鲜配制的含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液。将半夏凝集素蛋白溶解于D-Hanks缓冲液中，配制成不同浓度的溶液。巨噬细胞分为7组，每组设置3个复孔，其中6组给予相同浓度的半夏凝集素蛋白溶液(50 mg·L-1)，空白组给予相同体积的D-Hanks缓冲液，其中3组给予不同浓度的姜辣素溶液(20，200，2 000 mg·L-1)，另外2组给予阿司匹林溶液(10，50 mg·L-1)，摇晃均匀后于37 ℃，5%CO2环境中孵育。1 h后弃去细胞上清液，加入用RPMI-1640培养液稀释2 500倍的ROS探针孵育，20 min后在倒置荧光显微镜下观察探针显色情况，放大倍数200倍，激发波长598 nm。随即使用荧光酶标仪定量检测探针发光量，激发波长560 nm ......
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